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植物miRNA及piRNA的逆轉(zhuǎn)錄

瀏覽次數(shù):6897 發(fā)布日期:2014-9-29  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)


miRNA在植物的發(fā)育、抗病、和應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。一般認(rèn)為,這些小的非編碼RNA通過靶向mRNA剪切,在后轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)植物的基因表達(dá)。這些基因表達(dá)中的靶向變化由數(shù)百個(gè)成熟miRNA的差異表達(dá)所調(diào)控,每個(gè)成熟miRNA結(jié)合在靶mRNA的特定序列上。因此,對(duì)植物的成熟miRNA調(diào)控和表達(dá)進(jìn)行分析,能夠?yàn)橹参锏慕M織發(fā)育、干旱保護(hù)及疾病防御機(jī)理提供寶貴信息。目前基本無(wú)法通過qRT-PCR對(duì)植物的成熟miRNA進(jìn)行分析,由于植物miRNA的特性,基于多聚腺苷酸的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)對(duì)其反應(yīng)效率十分低下。QIAGEN推出了獨(dú)特的解決方案,能夠?qū)χ参锝M織中的成熟miRNA進(jìn)行通用的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3’端修飾的小RNA的cDNA合成;是針對(duì)具有3’端甲基化(2’-O-Me)修飾的小RNA進(jìn)行無(wú)偏差 cDNA合成的通用型試劑盒。本試劑盒專為基于實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的小RNA表達(dá)分析應(yīng)用設(shè)計(jì)和優(yōu)化,能夠配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等產(chǎn)品使用。這一類通過功能驗(yàn)證的分析和芯片產(chǎn)品可應(yīng)用于水稻、玉米、大豆、煙草和其他一些重要農(nóng)業(yè)作物的檢測(cè),以及植物學(xué)相關(guān)的研究。在3’末端堿基具有2’-O-Me甲基化修飾的小RNA(如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA))中,一般不具有poly A尾結(jié)構(gòu),因此無(wú)法通過多聚腺苷酸依賴的cDNA合成方法有效地反轉(zhuǎn)錄。專用的miScript Plant RT Kit通過首先向植物miRNA的3’末端連接一個(gè)接頭解決了這一難題。不同于多聚腺苷酸化,這一鏈接反應(yīng)不會(huì)受到植物miRNA 3’末端堿基上存在的2’-O-Me甲基化修飾的負(fù)面抑制。接頭一旦連接成功,即可實(shí)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

性   能

miScript Plant RT Kit與miScript Plant qPCR System的聯(lián)合使用,能夠確保針對(duì)植物樣本實(shí)現(xiàn)靈敏和特異性的miRNA檢測(cè)和定量工作。由于許多miRNA表達(dá)豐度很低,因此檢測(cè)靈敏度對(duì)于確保獲得可靠數(shù)據(jù)至關(guān)重要。miScript Plant qPCR System能夠提供優(yōu)異的靈敏度,寬廣的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)范圍,以及始終如一的高擴(kuò)增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能將幫助您于首次嘗試時(shí),即在技術(shù)重復(fù)和生物重復(fù)樣本之間獲得高度可重復(fù)的結(jié)果。

操作流程

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可方便地進(jìn)行。通常在連接反應(yīng)介導(dǎo)的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中,一般使用含有3’端2’-O-Me修飾小RNA的總RNA做為起始材料。反轉(zhuǎn)錄是一個(gè)簡(jiǎn)單直接的操作步驟,包含了37℃下1小時(shí)的溫育反應(yīng),以及之后在95℃下通過短暫孵育對(duì)反應(yīng)進(jìn)行失活。

應(yīng)   用

miScript Plant RT Kit通常做為miScript Plant PCR System的一部分,用于進(jìn)行: 

  • 植物成熟miRNA的定量和表達(dá)譜分析
  • piRNA的定量和表達(dá)譜分析

相關(guān)產(chǎn)品信

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

218760

miScript Plant RT Kit (12)

218761

miScript Plant RT Kit (50)

218762

miScript Plant RT Kit (96)

218073

miScript SYBR Green PCR Kit (200)

218075

miScript SYBR Green PCR Kit (1000)

218076

miScript SYBR Green PCR Kit (2000)

218300

miScript Primer Assay (100)

Varies

miScript miRNA PCR Arrays

 以上信息來(lái)源QIAGEN:

http://www.qiagen.com/cn/products/catalog/assay-technologies/mirna/miscript-plant-rt-kit/#productdetails 




 閱讀原文:http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014090029.html

發(fā)布者:杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司
聯(lián)系電話:4006721600
E-mail:network@liankebio.com

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