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微生物學技術:酵母細胞破碎實驗

瀏覽次數:1408 發布日期:2014-8-25  來源:上海北諾生物科技有限公司

標簽: 酵母 細胞 破碎

細胞破碎技術是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內合成的非分泌型生化物質的基礎。 結合重組DNA技術和組織培養技術上的重大進展,以前認為很難獲得的蛋白質現在可以大規模生產。

實驗方法
  • 玻璃珠破碎法
  • 液氮破碎法
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟
1.  培養并收集酵母菌細胞,在酵母消解酶緩沖液重懸菌體沉淀之前,測定壓緊細胞的體積,以下所有步驟均在4℃進行。

2.  用1體積的玻璃珠破菌緩沖液重懸細胞。
 
3.  用2體積的玻璃珠破菌緩沖液與細胞混合,加4體積冰冷的酸洗玻璃珠。
 
4a.  當壓緊的細胞休積<10 ml,將細胞懸液轉移至合適大小的帶螺口的離心管中(懸液占離心管≤60%~70%的容積),于4℃以最大速度下振蕩30~60 s,將管置于冰上放置1~2 min,重復3~5次,在顯微鏡下檢査破細胞的程度,繼續步驟5。

4b.  當壓緊的細胞體積>10 ml,將細胞懸液轉移到合適大小的玻璃珠攪拌容器中(建議用導熱性能好的不銹鋼材料)并加玻璃珠破菌緩沖液至容器的邊緣,但加到容器中的緩沖液不超過1個細胞懸液的體積。裝好攪拌桿和螺蓋,確保將容器中所有空氣排盡(排除空氣以防止起泡和蛋白質變性這一點非常重要),高速攪拌60 s,冰上放置1~2 min,重復3~5次。

5.  沉淀玻璃珠,輕輕倒出上清,加入2~4體積的玻璃珠破菌緩沖液,顛倒管5~10次,待玻璃珠沉淀后輕輕倒出上清,合并上清液。

6.  合并的上清液于4℃,12 000 g 離心60 min,收集上清即為抽提液。長期貯存時,將其分成小份于液氮中快速冷凍,-80℃貯存。
發布者:上海北諾生物科技有限公司
聯系電話:021-57730393,15800960770
E-mail:beinuobio@163.com

標簽: 酵母 細胞 破碎
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