ELISpot實(shí)驗(yàn)操作流程介紹

瀏覽次數(shù)：6589　發(fā)布日期：2014-4-23　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

ELISPOT全名為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)），能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況。其技術(shù)原理，一句話(huà)概括就是：用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來(lái)。

將細(xì)胞因子特異性單克隆抗體包被于乙醇處理過(guò)的PVDF膜板上。具體板子處理和包被方法請(qǐng)參考： https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/plate-coating-guide
	將細(xì)胞加入到酶標(biāo)孔中，不同組加不同的刺激劑或者不加刺激劑。具體細(xì)胞處理方法請(qǐng)參考： https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/cell-handling
細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子與包被抗體結(jié)合。
		將多余細(xì)胞除去并洗板后，將生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體加入到酶標(biāo)孔中。
加入連霉親和素標(biāo)記的酶偶聯(lián)物
加入底物 https://www.mabtech.com/knowledge-center/tutorials-and-guidelines/enzymes-substrates/enzyme-conjugates
		使用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)讀板儀讀取斑點(diǎn)并分析。信息來(lái)源： https://www.mabtech.com/knowledge-center/assay-principles/elispot-assay-principle/elispot-step-step