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標(biāo)記羊抗兔IgG保存策略

瀏覽次數(shù):2164 發(fā)布日期:2014-4-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

       辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗兔IgG應(yīng)用:WB(1:1000 - 1:50000)、ELISA(1:500 - 1:10000) IHC(1:50 - 1:500)。 由于具體實(shí)驗(yàn)中檢測方法的靈敏度,溫度及孵育時(shí)間等因素均可影響抗體最適工作濃度,所以實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行特定實(shí)驗(yàn)時(shí),需根據(jù)具體情況優(yōu)化最適使用濃度。 反應(yīng)性:該山羊抗兔二抗與兔IgG分子有特異性反應(yīng),與其它兔免疫球蛋白(包括IgM、IgE、IgD、IgA等)的輕鏈有交叉反應(yīng)。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無交叉反應(yīng),但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應(yīng)。

    辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗兔IgG hrp過量導(dǎo)致wb實(shí)驗(yàn)過程中的ecl猝滅現(xiàn)象的原理:淬滅是由于顯色反應(yīng)中的hrp酶量過多造成的,推薦的改進(jìn)方法是,減少hrp的量,包括,減少蛋白的上樣量,降低一抗?jié)舛龋档投節(jié)舛冗@三個(gè)方法,總之就是減少hrp在膜上的結(jié)合量。可能有的人會(huì)問,我大量的抗體或者蛋白上樣量都做不出來,減少反而能做出來,這怎么可能呢?呵呵,其實(shí)我們首先要弄清楚,在顯色反應(yīng)中誰是過量的問題,當(dāng)然是底物,因?yàn)椋炼扰chrp的量相關(guān),hrp與目的蛋白的量相關(guān),只有底物過量hrp的量才能清楚的反應(yīng)目的蛋白的量(這里就不考慮定性實(shí)驗(yàn)了)。因此,hrp相對于底物必須是不足量的。其次,應(yīng)該有很多朋友都遇到過這樣一個(gè)現(xiàn)象:就是曝光時(shí),條帶特別亮,可是壓上一兩次片子,條帶就滅了,但是如果把這張膜再用TBST洗過夜,再去曝光,熒光反而能持續(xù)更長的時(shí)間,這就是由于洗滌,使原先一些結(jié)合不牢的二抗掉了下來,曝光時(shí),hrp的量降低了,不會(huì)較快的消耗底物,所以,發(fā)光的時(shí)間就變長了。

    最后對標(biāo)記羊抗兔IgG該如何保存呢?專家建議:保存在-20°C.保質(zhì)期為收到貨物后至少1年,合適的保存方式可以延長保質(zhì)期。推薦閱讀》》TRITC標(biāo)記二抗供應(yīng) http:///cpdg/2014/0417/701.html


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