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如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜

瀏覽次數:3705 發布日期:2014-2-27  來源:賽多利斯
 
硝酸纖維素膜(NC膜)是蛋白和核酸雜交最常用的印跡膜,是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環境下,大多數帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發生疏水作用而高親和力的結合在一起,雖然這其中的機制還不是十分清楚,但由于硝酸纖維素膜的這個特性,而且易于封閉非特異性結合,從而得到了廣泛的應用。目前市場上的NC膜產品數量眾多,品質參差不齊。

從膜的質地上來看,最重要的指標就是單位面積上能夠結合的蛋白的量。硝酸纖維素膜的結合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關,市場上有些硝酸纖維素膜通常會還有大量的醋酸纖維素,因而降低了蛋白的結合量。如果采用的是100%純度的硝酸纖維素,保證了最大的蛋白結合量,可達80-150μg/cm2。Sartorius的NC膜是致密的 100% 硝酸纖維素濾膜,是用于Western、Northern和Southern雜交的優良濾膜。由于100%的純度,因而也大大減少了非特異性的結合,降低雜交背景,保證最大的蛋白結合量,可達150-200μg /cm2。除此之外,Sartorius的NC膜質的精良,具有良好的韌性與強度。相比傳統的NC膜質地比較脆,漂洗一兩次就會破損,Sartorius的NC膜的優勢就凸顯了出來,既能反復使用,又不易破損,是Western、Northern和Southern雜交實驗的最佳選擇。

從膜的選擇上來看,根據被轉移的蛋白分子量大小,要選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm,蛋白的轉移就很難進行了。因此,我們通常用0.45μm和0.2μm兩種規格的硝酸纖維素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了,如果用0.45μm的膜就會發生“Blowthrough”的現象。Sartorius的NC膜也有兩種可供選擇,幾乎能夠涵蓋大多數用戶的需求。孔徑為 0.2 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉印小分子蛋白和核酸,能避免由于膜轉移而導致的樣品損失;孔徑為 0.45 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉印大分子蛋白和核酸以及大多數分析型印跡,包括蛋白ssDNA 和 RNA 轉印。

從膜的使用上來看,市場上的NC膜有需要預處理才能使用的,也有不需要預處理可直接使用的。Sartorius的NC膜不需要經過無水甲醇預處理,膜僅需要在水中簡單潤濕,而后放入轉移緩沖液中。簡單操作就可以放心使用。


因此, Sartorius的NC膜是相關雜交科研實驗的理想選擇。

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