九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 細胞技術專題:小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗

細胞技術專題:小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗

瀏覽次數:3305 發布日期:2014-2-13  來源:上海北諾生物科技有限公司

小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養可以:(1)用于細胞保種;(2)用于分子生物學研究;(3)用于基因治療相關研究。

實驗方法
  • 胰酶消化法1
  • 胰酶消化法2
實驗方法原理
將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF生長培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟
一、實驗材料準備

1.   動物
 
孕期14至16天的孕鼠(小鼠)。
 
2.   試劑
無Ca2+和Mg2+的PBS(D-PBS)、0.05%胰酶、0.53 mmol/L EDTA溶液、MEF生長培養基(高糖DMEM加10%FBS)。
 
3.  器械
 
眼科直剪3把、眼科直鑷3把、眼科彎鑷2把、玻璃平皿3套、200目尼龍濾網、50 ml和15 ml離心管和手術刀片。以上物品均需要高壓滅菌消毒處理。

二、具體操作

1.  處死孕鼠,全身置于75%酒精里浸泡,然后在超凈臺中用剪刀和鑷子將孕鼠皮膚剪開,用另外一組剪刀、鑷子剪開腹部肌層,露出子宮,最后用第三組剪刀和鑷子將子宮小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中,沖洗去血。
 
2.  用兩把彎鑷子將胚胎外的胞膜小心去除,然后夾掉頭和內臟,將其余胚胎轉移到一個裝有30 ml D-PBS的50 ml離心管中,輕輕顛倒兩次,倒掉D-PBS,再重復此步驟一次,注意要留少許D-PBS,然后將胚胎轉移到另一裝有D-PBS的平皿中,并用手術刀片將其細細切碎。
 
3.  用200 μl的移液槍反復、快速地吹打平皿中的液體,轉移至15 ml離心管中,于4℃ 1500 rpm離心5分鐘,倒掉上清,以10 ml胰酶重懸沉淀,放在37℃水浴中消化30分鐘,且每隔五分鐘輕輕晃動,使之充分消化。
 
4.   將上層細胞懸液倒入一個裝有10 ml MEF生長培養基的50 ml離心管中,用200目的尼龍網過濾后,以1 500 rpm離心5分鐘收集細胞,再用30 ml MEF生長培養基洗滌兩次。
 
5.  細胞沉淀用15 ml MEF生長培養基重懸后進行細胞計數(一般8只14天的胎鼠可獲得2-3×107細胞)。
 
6.   3×106細胞懸浮于15 ml MEF生長培養基中,接種到200 ml培養瓶中。
 
7.  24小時后更換新鮮的MEF生長培養基。
 
8.  細胞長滿后,先用D-PBS沖洗,倒掉后加胰酶消化(此步時間不宜過長,作者一般不超過五分鐘),按1:5傳代。
 
9.  細胞再次長到覆蓋率80-90%左右,將其消化后,常規凍存(凍存液要現配)。
 

小鼠胚胎成纖維細胞(MEF 100倍)

注意事項
1.   原代培養,一定要避免污染。
 
2.   MEF生存能力有限,如果不凍存,體外存活十代左右。
 
3.  凍存后復蘇的細胞只能傳代一次,因為這些細胞繁殖能力有限。
 
4.  消化細胞時間不要過長。
發布者:上海北諾生物科技有限公司
聯系電話:021-57730393,15800960770
E-mail:beinuobio@163.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 故城县| 荥经县| 铁岭市| 六安市| 湛江市| 望城县| 吉水县| 晋中市| 平谷区| 武山县| 清镇市| 米易县| 大田县| 庆安县| 略阳县| 上蔡县| 定州市| 丹棱县| 嘉荫县| 陕西省| 安福县| 华亭县| 绩溪县| 华宁县| 吉林省| 普宁市| 东光县| 茶陵县| 嘉义县| 兴化市| 张掖市| 延吉市| 琼结县| 吉林省| 德昌县| 高清| 镇平县| 黄龙县| 漠河县| 淮滨县| 洛隆县|