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FITC標記抗體-Marsshall氏法

瀏覽次數:2201 發布日期:2010-10-13  來源:www.pricells.com.cn
FITC標記抗體-Marsshall氏法
 
材料:
抗體球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、異硫氰酸熒光素、1%硫柳汞水溶液、三角燒瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml燒杯)、電磁攪拌器、滅菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等;
 
方法與步驟:
1.       抗體的準備。量取適量已知濃度的球蛋白溶液,置入三角燒瓶中,加入生理鹽水及碳酸鹽緩沖液,使最終球蛋白濃度為20mg/ml,緩沖液容量為總量的1/10,混勻,將三角燒瓶置冰槽中,電磁攪拌速度適當,即以不起泡沫為宜攪拌5—10min;
2.       熒光素的準備。根據欲標記的蛋白質總量,按每毫克蛋白加0.01mg熒光素的比例,用分析天平準確稱取所需的異硫氰酸熒光素粉末;
3.       結合(或稱標記)。將稱取的熒光色素緩慢加入到球蛋白溶液中,并不停地攪拌,避免將熒光素粘于三角燒瓶壁或攪拌玻璃棒上,在大約5—10min內加完。然后繼續攪拌12—18h。因熒光素與球蛋白結合期間要求必須保持蛋白溶液于4℃左右,所以需要即使地添冰或去水。亦可將結合裝置安放在4℃冰箱或冰庫中;
4.       透析。熒光素與球蛋白結合完畢后,將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min,除去其中少量的沉淀物后,裝入透析袋中再置于燒杯中,在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析過夜;
5.       過柱。取透析過夜的標記物,過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱,分離出游離熒光素,收集標記的熒光抗體進行鑒定;
 
發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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