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原代細胞骨架的染色方法

瀏覽次數:3056 發布日期:2010-10-11  來源:www.pricells.com.cn
原代細胞骨架的染色方法
 
微絲的顯示方法步驟:
1.    用PBS液漂洗蓋片培養的原代細胞3次,每次30s;
2.    用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min;
3.    用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次,每次10min;
4.    PBS漂洗3次;
5.    用羅丹明(rhodamine)標記的鬼筆環肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應15min;
6.    PBS漂洗3次;
7.    60%甘油+熒光防淬劑封片;
8.    熒光顯微鏡觀察;
 
微管的顯示方法:
1.    用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次,每次30s;
2.    在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;
3.    用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
4.    投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
5.    用PBS漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
6.    向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45min—1h;
7.    向碟皿內勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
8.    向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗,其后操作按步驟6進行;
9.    按步驟7和3操作;
10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上;
11.將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察;
發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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