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正常人骨膜內成骨細胞原代培養

瀏覽次數:2274 發布日期:2010-9-2  來源:www.pricells.com.cn

正常人骨膜內成骨細胞原代培養

實驗材料:

1. 骨組織來源:手術切除之骨組織;

2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;

3. 消化液:0.25%胰蛋白酶溶液,1mg/mlⅠ型膠原酶溶液;

4. 培養液:RPMI 1640培養基,配制培養液時加入15%的小牛血清,并用5.6% NaHCO3調節至pH 7.2;

實驗方法:

1. 取人手術切除之骨膜,放入盛有緩沖液的培養皿中,去除附于骨膜上的結締組織;

2. 將骨膜剪碎成1—2mm2大小的組織塊(膜片);

3. 加入0.1%EDTA與0.25%胰蛋白酶(1:1,V/V)混合消化液,在37℃下消化20—30min。以1000r/min離心1—2min,沉淀骨膜組織塊,除去上清液;

4. 用緩沖液洗沉淀骨膜組織塊2—3次,重復上述離心過程;

5. 在37℃下再用1mg/mlⅠ型膠原酶消化骨膜組織塊約90min。離心(1000r/min,5—10min)以沉淀細胞,棄去消化液。再用培養液洗1—2次,離心收集細胞;

6. 加培養液于離心管中分散細胞,調成細胞密度1×106—5×106個/ml的懸液。將細胞懸液種植于培養瓶中。也可不使用消化酶而行植塊培養法種植培養,培養條件同前;

7. 待細胞長滿培養瓶壁后進行傳代培養;

發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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