前言

MagNA Pure 96是最近進(jìn)入市場的一種全新儀器：它是一種全自動(dòng)、超高速的系統(tǒng)，它能用于將高質(zhì)量核酸從各種樣品類型中高速分離，1小時(shí)以內(nèi)即可完成多至96個(gè)樣本的自動(dòng)純化，處理的樣品容量最高達(dá)到1 ml。該系統(tǒng)采用裝有預(yù)裝式即用型試劑的優(yōu)化試劑盒，并配有相應(yīng)的自動(dòng)分離方法。 這種試劑盒的配置基于沿用已久的磁珠技術(shù)，后者成功用于不同的MagNA Pure系統(tǒng)已有多年。MagNA Pure 96試劑盒由配有不同預(yù)裝式密封緩沖液容器的試劑盤和含磁粉的專用瓶組成。

可提供的所有試劑盒都有小容量（SV）和大容量（LV）的不同規(guī)格，可根據(jù)要處理的樣品量決定。 本文描述了2種MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸試劑盒及其方法的特征和性能。




圖1：試劑盒組件。 試劑盒、試劑盤、磁珠瓶。

材料和方法

新的試劑盒及方法是用人EDTA血漿、枸櫞酸鹽血漿、血清和全血以及培養(yǎng)細(xì)胞（K562和HeLa）作為樣品材料開發(fā)和測試的。

 

全血不需要經(jīng)過預(yù)處理即可用于基因組DNA分離。 培養(yǎng)細(xì)胞小球在使用前要懸浮于PBS中。

 

在病毒核酸分離時(shí)，使用前在樣品中添加不同量的DNA病毒（巨細(xì)胞病毒、EB病毒、細(xì)小病毒B19）和RNA病毒（甲型肝炎病毒、甲型H1N1流感病毒）。然后用移液管將樣品移入MagNA Pure 96儀器上的MagNA Pure 96處理盒中。所有樣品至少以8倍復(fù)制進(jìn)行試驗(yàn)。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，純化核酸的洗脫體積被設(shè)定為50μl、100μl或200μl。在LightCycler® 480儀器上采用吸光度（OD）測定、瓊脂糖凝膠電泳和/或參數(shù)特定的定量實(shí)時(shí)PCR和RT-PCR分析對洗脫液進(jìn)行分析。采用15μl各自混合母液和5μl各自洗脫液建立擴(kuò)增反應(yīng)，運(yùn)行45個(gè)循環(huán)。

 

結(jié)果和討論

試劑盒的組成：排列在試劑盤中的預(yù)裝式試劑容器，便于加載；分開放置、含磁珠（MGP）懸液的瓶子（圖1）。試劑盤和瓶子都在運(yùn)行前放入儀器抽屜中各自的位置。使用后容器可以方便地重新密封，并保存以待必要時(shí)進(jìn)行后續(xù)的運(yùn)行。MGP瓶具有特殊的瓶蓋，可以在儀器的針穿過后自動(dòng)重新密封。所有組件在室溫下都能保持穩(wěn)定。

 

MagNA Pure 96 DNA和病毒核酸小容量規(guī)格用于從200μl全血，或從5×10⁵個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞中分離基因組DNA。 它還可以從200μl血漿、血清或全血中分離病毒DNA或RNA。試劑盒包括3個(gè)預(yù)裝式試劑容器，每個(gè)容器最多可進(jìn)行192次反應(yīng)（即每個(gè)試劑盒進(jìn)行576次純化）。