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免疫組織化學(xué)染色方法(S-P法)

瀏覽次數(shù):7787 發(fā)布日期:2009-11-9  來源:長沙贏潤

免疫組織化學(xué)染色方法(S-P法)

免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)是根據(jù)免疫學(xué)原理,利用抗體同特定抗原專一結(jié)合,對抗原進行定位測定的技術(shù)。抗原主要為大分子或與大分子相結(jié)合的小分子;抗體則是由漿細(xì)胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物,再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng),即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。

常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法(immunofluorescent technique),常用的螢光素有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate)、羅丹明(rhodamine)等。酶標(biāo)記的稱為酶標(biāo)免疫法(enzyme-labeled antibody method),常用的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase),酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物,從而顯示出抗原存在的部位。

抗體與抗原的結(jié)合方法可分為直接法和間接法兩種,直接法是將帶有標(biāo)記的抗體與抗原反應(yīng),顯示出抗原存在的部位。而間接法則是在抗體抗原初級反應(yīng)的基礎(chǔ)上,再用帶標(biāo)記的次級抗體同初級抗體反應(yīng),從而使初級反應(yīng)得到放大,顯示增強。

【實驗步驟】

1、石蠟切片4-5μm

2、切片脫蠟至水;

33%甲醇雙氧水阻斷室溫10分鐘;

40.01M(PH 7.2)磷酸鹽緩沖液(PBS)洗5分鐘´3次;抗原修復(fù),加入0.01MPH 6.0)檸檬酸緩沖液置微波爐中10330秒,之后可進行21分至130秒微波維持。

5、自然冷卻后PBS洗,加二抗同種動物非免疫血清封閉,室溫10分鐘;

6、免洗,傾出血清,分別滴加配制好的一抗4℃過夜;

7PBS5分鐘 ´ 3次;

8、滴加生物素標(biāo)記的第二抗體,室溫孵育10分鐘;

9PBS5分鐘 ´ 3次;

10、滴加鏈親和素-過氧化物酶,室溫10分鐘;

11PBS5分鐘 ´ 3次;

12、新鮮配制的DAB溶液顯色3-10分鐘;

13、自來水洗,蘇木素淺染細(xì)胞核,分化。自來水沖洗返蘭,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。

發(fā)布者:長沙贏潤生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:0731-84317068
E-mail:1670829912@qq.com

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