貓紅細胞單克隆抗體的基礎特性、制備流程及應用場景
瀏覽次數:131 發布日期:2025-7-1
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貓紅細胞單克隆抗體(Feline Red Blood Cell Monoclonal Antibody,fRBC-McAb)是針對貓紅細胞表面特異性抗原制備的單克隆抗體,憑借其特異性強、均一性高等特點,在貓血型鑒定、輸血安全保障、免疫性血液病診斷及相關研究中發揮著關鍵作用。以下從基礎特性、制備流程、應用場景等方面詳細介紹:
一、貓紅細胞與 fRBC-McAb 的基礎特性
- 貓紅細胞的抗原特征:貓紅細胞表面存在多種獨特抗原,其中AB 血型系統是最主要的血型系統(分為 A 型、B 型、AB 型),由紅細胞表面的糖蛋白抗原決定(A 型為 N - 乙酰神經氨酸,B 型為神經氨酸);此外還有 Mik 血型系統等次要抗原。這些抗原是引發貓輸血反應的核心因素(如 B 型貓接受 A 型血會發生嚴重溶血),也是 fRBC-McAb 的主要靶向對象。
- fRBC-McAb 的核心特性:由單一 B 淋巴細胞克隆分泌,僅識別貓紅細胞表面特定抗原的單一表位,具有特異性極強(可精準區分 A 型、B 型等不同血型抗原)、批次穩定性高(避免多克隆抗體成分復雜、批間差異大的問題)、可標準化生產等優勢,為貓紅細胞相關研究和臨床應用提供了可靠工具。
二、fRBC-McAb 的制備流程
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免疫原制備與動物免疫:
- 免疫原處理:采集健康貓的新鮮抗凝血(需明確血型,如 A 型或 B 型貓血),用生理鹽水或 PBS 反復洗滌(去除血漿、白細胞等雜質),制備純化的貓紅細胞懸液(濃度通常為 2-5%)。
- 動物免疫:常用 Balb/c 小鼠,通過腹腔或靜脈注射進行免疫。采用 “初次免疫 + 多次加強免疫” 策略(間隔 1-2 周),最后一次加強免疫后 3-5 天取脾臟細胞,用于細胞融合。部分情況下可添加佐劑(如弗氏佐劑)增強免疫應答,但需注意避免對紅細胞抗原的破壞。
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細胞融合與雜交瘤篩選:
- 融合操作:將免疫小鼠的脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞(如 SP2/0)通過聚乙二醇(PEG)或電融合技術融合,形成雜交瘤細胞。
- 篩選培養:利用 HAT 選擇培養基(含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)篩選存活的雜交瘤細胞(未融合的骨髓瘤細胞和 B 淋巴細胞因代謝缺陷無法存活)。
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陽性克隆鑒定與克隆化:
- 鑒定方法:通過凝集試驗(如試管法或玻片法)檢測雜交瘤細胞上清液與不同血型貓紅細胞的反應(如抗 A 型 fRBC-McAb 應僅與 A 型紅細胞發生凝集);或采用流式細胞術(標記熒光二抗后檢測熒光信號)驗證抗體與紅細胞表面抗原的特異性結合。
- 克隆化培養:對陽性細胞株通過有限稀釋法或單細胞克隆技術進行多次克隆,確保獲得能穩定分泌目標抗體的單克隆細胞株。
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抗體生產與純化:
- 小規模生產:將雜交瘤細胞腹腔注射到預處理(如注射降植烷)的 Balb/c 小鼠,收集腹水,經離心、飽和硫酸銨鹽析或蛋白 A/G 親和層析純化,獲得高純度抗體。
- 大規模生產:通過生物反應器體外培養雜交瘤細胞,從培養液中純化抗體,適用于診斷試劑盒的工業化生產。
三、主要應用領域
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貓血型鑒定與輸血安全:
- 貓 AB 血型系統中,B 型貓血清中天然存在高滴度抗 A 抗體,若輸入 A 型血會引發急性溶血反應(死亡率極高);A 型貓接受 B 型血也可能出現輕度反應。fRBC-McAb(如抗 A 型、抗 B 型單克隆抗體)可通過快速凝集試驗精準鑒定貓血型(如抗 A 型抗體與待檢紅細胞凝集則為 A 型),是保障貓輸血安全的核心工具。
- 應用示例:流浪貓救助中,對需要輸血的貓用 fRBC-McAb 快速分型,確保供血貓與受血貓血型匹配(如 A 型貓接受 A 型血,B 型貓接受 B 型血)。
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免疫介導性溶血性貧血(IMHA)的診斷:
- IMHA 是貓常見的自身免疫性疾病,患病貓體內產生抗自身紅細胞的抗體,導致紅細胞被破壞。fRBC-McAb 可通過直接抗球蛋白試驗(DAT,即 Coomb’s 試驗) 檢測紅細胞表面吸附的自身抗體:若待檢紅細胞與 fRBC-McAb 反應出現凝集,提示存在自身抗體,輔助確診 IMHA。
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貓血型相關研究:
- 作為特異性探針,研究貓 AB 血型抗原的分子結構(如糖鏈修飾差異)、遺傳機制(如 AB 型的遺傳模式)及與疾病的關聯(如某些品種貓的血型分布特點)。
- 用于探索貓紅細胞抗原在免疫應答中的作用,如 B 型貓抗 A 抗體的產生機制。
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診斷試劑盒開發:
- 基于 fRBC-McAb 開發標準化的貓血型檢測試劑盒(如試紙條、微量板法試劑盒),操作簡便、結果快速,適合臨床一線使用(如寵物醫院、動物救助站)。
- 用于開發 IMHA 診斷試劑盒,提高疾病診斷的準確性和效率。
四、優勢與注意事項
- 核心優勢:
- 特異性精準:可專一識別 A 型或 B 型等特定血型抗原,避免交叉反應(如不與其他物種紅細胞反應),確保血型鑒定結果可靠。
- 標準化程度高:批間差異小,適合大規模臨床應用和試劑盒生產,克服多克隆抗體(如 B 型貓血清抗 A 抗體)供應不穩定、效價波動大的問題。
- 注意事項:
- 抗原表位匹配:不同 fRBC-McAb 可能識別同一抗原的不同表位,需根據應用場景驗證(如血型鑒定需確保抗體與目標血型抗原的強反應性)。
- 保存條件:純化后的抗體需在 - 20℃凍存,避免反復凍融;使用前需通過凝集試驗驗證活性,確保有效性。
五、應用前景
隨著寵物貓飼養量增加,貓輸血需求和免疫性疾病診斷需求日益增長。fRBC-McAb 的開發解決了傳統血型鑒定方法(如利用 B 型貓血清作為抗 A 試劑)的局限性(如血清來源不穩定、特異性不足)。未來研究可聚焦于:
- 開發針對貓次要血型抗原(如 Mik 抗原)的 McAb,完善血型檢測體系(部分貓因 Mik 抗原不匹配可能發生遲發性輸血反應);
- 探索 fRBC-McAb 在 IMHA 靶向治療中的潛力(如通過抗體中和自身抗體,減少紅細胞破壞)。