貓紅細胞單克隆抗體的基礎特性、制備流程及應用場景

瀏覽次數：131　發布日期：2025-7-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

貓紅細胞單克隆抗體（Feline Red Blood Cell Monoclonal Antibody，fRBC-McAb）是針對貓紅細胞表面特異性抗原制備的單克隆抗體，憑借其特異性強、均一性高等特點，在貓血型鑒定、輸血安全保障、免疫性血液病診斷及相關研究中發揮著關鍵作用。以下從基礎特性、制備流程、應用場景等方面詳細介紹：

一、貓紅細胞與 fRBC-McAb 的基礎特性

貓紅細胞的抗原特征：貓紅細胞表面存在多種獨特抗原，其中AB 血型系統是最主要的血型系統（分為 A 型、B 型、AB 型），由紅細胞表面的糖蛋白抗原決定（A 型為 N - 乙酰神經氨酸，B 型為神經氨酸）；此外還有 Mik 血型系統等次要抗原。這些抗原是引發貓輸血反應的核心因素（如 B 型貓接受 A 型血會發生嚴重溶血），也是 fRBC-McAb 的主要靶向對象。
fRBC-McAb 的核心特性：由單一 B 淋巴細胞克隆分泌，僅識別貓紅細胞表面特定抗原的單一表位，具有特異性極強（可精準區分 A 型、B 型等不同血型抗原）、批次穩定性高（避免多克隆抗體成分復雜、批間差異大的問題）、可標準化生產等優勢，為貓紅細胞相關研究和臨床應用提供了可靠工具。

二、fRBC-McAb 的制備流程

免疫原制備與動物免疫：
- 免疫原處理：采集健康貓的新鮮抗凝血（需明確血型，如 A 型或 B 型貓血），用生理鹽水或 PBS 反復洗滌（去除血漿、白細胞等雜質），制備純化的貓紅細胞懸液（濃度通常為 2-5%）。
- 動物免疫：常用 Balb/c 小鼠，通過腹腔或靜脈注射進行免疫。采用 “初次免疫 + 多次加強免疫” 策略（間隔 1-2 周），最后一次加強免疫后 3-5 天取脾臟細胞，用于細胞融合。部分情況下可添加佐劑（如弗氏佐劑）增強免疫應答，但需注意避免對紅細胞抗原的破壞。
細胞融合與雜交瘤篩選：
- 融合操作：將免疫小鼠的脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）通過聚乙二醇（PEG）或電融合技術融合，形成雜交瘤細胞。
- 篩選培養：利用 HAT 選擇培養基（含次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）篩選存活的雜交瘤細胞（未融合的骨髓瘤細胞和 B 淋巴細胞因代謝缺陷無法存活）。
陽性克隆鑒定與克隆化：
- 鑒定方法：通過凝集試驗（如試管法或玻片法）檢測雜交瘤細胞上清液與不同血型貓紅細胞的反應（如抗 A 型 fRBC-McAb 應僅與 A 型紅細胞發生凝集）；或采用流式細胞術（標記熒光二抗后檢測熒光信號）驗證抗體與紅細胞表面抗原的特異性結合。
- 克隆化培養：對陽性細胞株通過有限稀釋法或單細胞克隆技術進行多次克隆，確保獲得能穩定分泌目標抗體的單克隆細胞株。
抗體生產與純化：
- 小規模生產：將雜交瘤細胞腹腔注射到預處理（如注射降植烷）的 Balb/c 小鼠，收集腹水，經離心、飽和硫酸銨鹽析或蛋白 A/G 親和層析純化，獲得高純度抗體。
- 大規模生產：通過生物反應器體外培養雜交瘤細胞，從培養液中純化抗體，適用于診斷試劑盒的工業化生產。

三、主要應用領域

貓血型鑒定與輸血安全：
- 貓 AB 血型系統中，B 型貓血清中天然存在高滴度抗 A 抗體，若輸入 A 型血會引發急性溶血反應（死亡率極高）；A 型貓接受 B 型血也可能出現輕度反應。fRBC-McAb（如抗 A 型、抗 B 型單克隆抗體）可通過快速凝集試驗精準鑒定貓血型（如抗 A 型抗體與待檢紅細胞凝集則為 A 型），是保障貓輸血安全的核心工具。
- 應用示例：流浪貓救助中，對需要輸血的貓用 fRBC-McAb 快速分型，確保供血貓與受血貓血型匹配（如 A 型貓接受 A 型血，B 型貓接受 B 型血）。
免疫介導性溶血性貧血（IMHA）的診斷：
- IMHA 是貓常見的自身免疫性疾病，患病貓體內產生抗自身紅細胞的抗體，導致紅細胞被破壞。fRBC-McAb 可通過直接抗球蛋白試驗（DAT，即 Coomb’s 試驗）檢測紅細胞表面吸附的自身抗體：若待檢紅細胞與 fRBC-McAb 反應出現凝集，提示存在自身抗體，輔助確診 IMHA。
貓血型相關研究：
- 作為特異性探針，研究貓 AB 血型抗原的分子結構（如糖鏈修飾差異）、遺傳機制（如 AB 型的遺傳模式）及與疾病的關聯（如某些品種貓的血型分布特點）。
- 用于探索貓紅細胞抗原在免疫應答中的作用，如 B 型貓抗 A 抗體的產生機制。
診斷試劑盒開發：
- 基于 fRBC-McAb 開發標準化的貓血型檢測試劑盒（如試紙條、微量板法試劑盒），操作簡便、結果快速，適合臨床一線使用（如寵物醫院、動物救助站）。
- 用于開發 IMHA 診斷試劑盒，提高疾病診斷的準確性和效率。

四、優勢與注意事項

核心優勢：
- 特異性精準：可專一識別 A 型或 B 型等特定血型抗原，避免交叉反應（如不與其他物種紅細胞反應），確保血型鑒定結果可靠。
- 標準化程度高：批間差異小，適合大規模臨床應用和試劑盒生產，克服多克隆抗體（如 B 型貓血清抗 A 抗體）供應不穩定、效價波動大的問題。
注意事項：
- 抗原表位匹配：不同 fRBC-McAb 可能識別同一抗原的不同表位，需根據應用場景驗證（如血型鑒定需確保抗體與目標血型抗原的強反應性）。
- 保存條件：純化后的抗體需在 - 20℃凍存，避免反復凍融；使用前需通過凝集試驗驗證活性，確保有效性。

五、應用前景

隨著寵物貓飼養量增加，貓輸血需求和免疫性疾病診斷需求日益增長。fRBC-McAb 的開發解決了傳統血型鑒定方法（如利用 B 型貓血清作為抗 A 試劑）的局限性（如血清來源不穩定、特異性不足）。未來研究可聚焦于：

開發針對貓次要血型抗原（如 Mik 抗原）的 McAb，完善血型檢測體系（部分貓因 Mik 抗原不匹配可能發生遲發性輸血反應）；
探索 fRBC-McAb 在 IMHA 靶向治療中的潛力（如通過抗體中和自身抗體，減少紅細胞破壞）。

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