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Avi-Tag高精度生物素化標記技術的原理、優勢及分子互作研究中的應用

瀏覽次數:470 發布日期:2025-5-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

蛋白標簽
蛋白質作為生命活動的核心執行者,其結構與功能異常與絕大多數疾病的發生發展密切相關。然而,針對特定蛋白質的深入研究一直面臨著重大技術挑戰。在這一背景下,蛋白標簽技術(Protein tag)應運而生,為蛋白質研究提供了革命性的解決方案。

傳統蛋白質檢測主要依賴免疫分析方法,包括蛋白質印跡(Western Blot)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和免疫共沉淀(IP)等。這些方法雖然應用廣泛,但存在明顯局限性:每次研究新靶蛋白都需要制備特異性抗體,不僅操作流程繁瑣,而且成本高昂。蛋白標簽技術的出現徹底改變了這一局面,通過將通用標簽與目標蛋白融合表達,實現了蛋白質檢測的標準化和便捷化。

蛋白標簽技術是指通過基因工程手段,將具有特定功能的多肽序列、蛋白質結構域或完整蛋白與目標蛋白進行融合表達的技術體系。該技術不僅能實現目標蛋白的高效檢測,還可用于蛋白質純化、定位追蹤等多種研究應用。目前,融合標簽技術已成為現代蛋白質研究中不可或缺的重要工具,大大提升了科研工作的效率和可靠性。

Avi Tag
生物素連接酶(Biotin ligase)是由大腸桿菌BirA基因編碼的雙功能蛋白質,具有獨特的分子識別特性。該酶不僅能特異性識別蛋白質分子中的特定氨基酸序列,催化生物素與靶蛋白的共價結合,還可作為轉錄阻遏蛋白調控生物素合成相關操縱子的表達。

Avi Tag標記技術正是基于這一原理發展而來的蛋白質標記方法。該技術利用生物素連接酶的酶促反應特性,實現對目標蛋白的特異性生物素標記。作為一種多功能短肽標簽,Avi Tag可廣泛應用于蛋白質固定化、純化分離及顯影檢測等多個領域。

從技術原理來看,Avi Tag通過在目標蛋白的N端或C端融合一段由15個氨基酸組成的短肽標簽,該標簽可被生物素連接酶BirA特異性識別并催化生物素共價連接。這種定點標記方式不僅實現了蛋白質的特異性生物素化,更重要的是顯著提高了親和素-生物素系統的結合特異性和親和力。目前,該技術已在蛋白質純化、蛋白質相互作用篩選、熒光標記等研究領域展現出重要應用價值。

Avi Tag的技術優勢
無論在體外或者體內,幾乎所有的蛋白都可以在一個獨特的Avi Tag位點輕易且有效地被生物素化;
生物素化是通過酶和底物的反應來實現,反應條件相當溫和而且標記的專一性極高;
生物素AviTag只有15個氨基酸,對蛋白空間結構的影響非常小。

產品信息



參考文獻
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