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> Thp-1單核細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇細(xì)節(jié)介紹
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Thp-1單核細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇細(xì)節(jié)介紹
瀏覽次數(shù):1122 發(fā)布日期:2025-2-25 來(lái)源:本站
僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
細(xì)胞簡(jiǎn)介
該細(xì)胞
是
從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞,細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒(méi)有免疫球蛋白,表達(dá)C3R和FcR;可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化;可作為轉(zhuǎn)染宿主。
細(xì)胞信息
細(xì)胞名稱:Thp-1人單核細(xì)胞白血病
生長(zhǎng)特性:懸浮、低密度容易聚團(tuán),高密度分散
倍增時(shí)間:60-70 小時(shí) (PubMed=
6970727
); 26 小時(shí) (PubMed=
25984343
); ~35-50 小時(shí) (DSMZ=ACC-16)
換液頻次:2~3次/周
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視實(shí)際細(xì)胞量決定)細(xì)胞密度在
8
X10
6
/ml
進(jìn)行傳代,不要超過(guò)
1X10
6
/ml
培養(yǎng)基推薦配方
:RPMI-1640(中喬新舟 貨號(hào):
ZQ-200
)+10%胎牛血清(中喬新舟
貨號(hào):ZQ0500
)
+1%雙抗(中喬新舟
貨號(hào):CSP006
)
+β-Mer 終濃度:0.05mM(中喬新舟 貨號(hào):CSP005,例:500ml添加500ul)
β-Mer(巰基乙醇)的作用
:
β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過(guò)大但需要維持時(shí),可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例(不超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍)。
(該圖片引用ATCC細(xì)胞培養(yǎng)參考圖)
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞對(duì)密度有一定依賴性,如果復(fù)蘇時(shí)離心去除了凍存液,建議復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不要進(jìn)行操作。密度低時(shí)細(xì)胞會(huì)抱團(tuán)生長(zhǎng)屬于細(xì)胞快速增殖生長(zhǎng)的一個(gè)階段,是正常情況。
THP-1細(xì)胞的傳代
A、
THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞且具有低密度依賴性,
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10
5
個(gè)活細(xì)胞/ mL時(shí)需要進(jìn)行傳代。細(xì)胞密度不要超過(guò)1×10
6
活細(xì)胞/ mL。
B、
比例一般為1:2-4,可以分瓶后補(bǔ)充培養(yǎng)液,不需要離心,t25培養(yǎng)瓶分瓶后補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml,
C、
如果對(duì)懸浮細(xì)胞密度把控不好,最佳的方式是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
D、
培養(yǎng)一周左右可以離心一次,以去除一些死細(xì)胞。
( 中喬新舟出庫(kù)細(xì)胞圖4X ,該圖片室溫放置5min拍照,該密度可進(jìn)行傳代,細(xì)胞計(jì)數(shù)密度為1.2X10
6
/ml)
THP-1細(xì)胞的凍存
A、用10%DMSO:900ul FBS + 100ul DMSO (有毒小心操作)或直接用無(wú)血清細(xì)胞凍存液。
B、收集生長(zhǎng)狀態(tài)較好的細(xì)胞于15 mL離心管中,調(diào)整細(xì)胞濃度至細(xì)胞數(shù)量大約200萬(wàn)-300萬(wàn)/mL凍存液為宜。
C、根據(jù)情況放入-80℃培養(yǎng)箱最多放置3個(gè)月,盡快轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
THP-1培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題
1、
THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦?
少量細(xì)胞聚團(tuán),呈葡萄串狀,屬于正常現(xiàn)象,特別是細(xì)胞密度較低時(shí),易出現(xiàn)這種情況。
密度高時(shí),細(xì)胞會(huì)自然分散開(kāi)
,如果密度高聚團(tuán)還是很嚴(yán)重,通過(guò)觀察細(xì)胞狀態(tài)、巰基乙醇添加量、或更換血清品牌或增大血清比例(不超過(guò)20%)有助于解決聚團(tuán)問(wèn)題。
2、
THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生
貼壁
怎么辦?
(中喬
新舟
細(xì)胞客戶咨詢圖)
2.1
THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況,不需要擔(dān)心。可以輕吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。
2.2
但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%,說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常,這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO
2
濃度、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)器皿是否異常。可用非TC處理過(guò)的培養(yǎng)瓶,不利于細(xì)胞貼壁。
3、
THP-1復(fù)蘇不起來(lái)怎么辦
?
3.1 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量,凍存時(shí)活細(xì)胞密度不能低于100萬(wàn)-300萬(wàn)/mL,
同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴性
,細(xì)胞復(fù)蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復(fù),
如有細(xì)胞碎片,待細(xì)胞密度增大后通過(guò)低速離心去除。
3.2
該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理,細(xì)胞密度低時(shí),培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換。
3.3 THP-1細(xì)胞中需要添加β-巰基乙醇,現(xiàn)用現(xiàn)配,不可直接添加至完培中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,會(huì)影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。
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上海中喬新舟生物科技有限公司
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E-mail:
hufangqiong@zqxzbio.com
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