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ELISA試劑盒的使用技巧

瀏覽次數:855 發布日期:2025-1-6  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
1.樣本的準備:盡量使用新鮮樣本,不使用有溶血,被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本,如不能立即測定,5天之內應4℃保存,對于1周后檢測的樣本應低溫凍存;做好分裝,長時間凍存的樣本避免反復凍融。

2.仔細閱讀說明書,熟悉整個流程,推薦畫出簡要步驟圖;提前準備試劑,比如常見20X洗滌液是濃縮液,需要用超純水提前稀釋準備好。一般的檢測抗體和酶標二抗需要用對應的稀釋液稀釋至工作濃度。

3.不同批次的試劑不要混用,檢查各組分的有效期。

4.預包被的酶標板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需溫度,預防后續實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分,而將一些弱陽性樣本不能檢出。

5.待測樣本加樣:待檢樣本過多時,建議分批操作;需要稀釋的樣本提前做好稀釋,注意選對合適稀釋液;控制好加樣時間,避免加樣費時過長造成誤差;注意加樣角度,垂直加入孔底,不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。

6.溫育和洗板:溫育時間和溫度一般根據試劑盒的說明書進行選擇。溫育時可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應”。①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢。

7.顯色:市售ELISA 試劑盒中,一般是以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的顯色液,反應條件為37℃或室溫反應15~30 min。顯色反應需要避光。

8.讀數和數據分析:終止后讀取結果盡量在15min內完成,讀取OD值時酶標儀需先預熱15~30 min再進行。數據分析一般用四參數和直線擬合法,選擇哪種擬合方式,可以依據標曲的相關系數(R2)來確定,R2一般需要大于0.99。
發布者:上海雅吉生物科技有限公司
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