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人前列腺癌細胞(Lncap)培養注意要點

瀏覽次數:1096 發布日期:2024-11-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
LNCaP克隆FGC是由JS Horoszewicz等人于1977年從一名50歲的白人男性(血型B +)的左鎖骨上淋巴結的穿刺活檢中分離出來的,該確診為轉移性前列腺癌。

該細胞不形成均一的單層而是成簇生長,所以傳代的時候要反復吹打形成單個細胞;該細胞貼壁不牢,達不到匯合狀態,而且會使培養基迅速變酸;傳代后48h內不要擾動,一定要保持培養瓶靜止。如果此時挪動培養瓶,會使大部分細胞從瓶底脫落。如果出現此種情況,需要重新孵育24~48h使細胞重新貼壁,細胞貼壁后可更換培養基。

細胞名稱:人前列腺癌細胞(STR鑒定正確)

細胞簡稱Lncap
產品貨號TCH-C238
種屬來源
組織來源前列腺
疾病特征前列腺癌
細胞形態上皮細胞樣
生長特性貼壁生長
培養體系RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
傳代比例:1:2-1:3,每2-3天換液一次
傳代周期:72-96 h
培養條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳,溫度:37℃
凍存條件:60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲存
質量檢測:細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

Lncap細胞培養注意事項

1. 該細胞并不形成一致的單層,而是形成集落

2. 該細胞會使培養基快速變酸,且生長緩慢,故傳代后 48 小時內不應擾動

3. 傳代后細胞貼壁較慢,48h 內不要擾動

4. 細胞貼壁性不強,普通 TC 處理的培養瓶或皿不能使細胞很好的貼壁,培養難度較高。 建議使用 Corning 的 cellbind 細胞培養瓶,或者使用多聚-L-賴氨酸溶液對培養底面包被后進行細胞培養

5. 常溫運輸途中,多數細胞會從培養瓶底分離,懸浮在培養基中,請收集懸浮細胞離心 后重新接種。

6. 收貨后,如果發現細胞漂浮或成團,可按下面的步驟進行處理:

(1)將培養瓶內的所有培養基,轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm 3min);
(2)去掉上清,用PBS重懸細胞,將細胞收集到一個離心管中,PBS震動離心管混勻即可,再次離心(1200rpm 3min);

(3)去掉上清,加入1ml左右0.25%胰酶,重懸混勻細胞。震動離心管,混勻即可,不能吹打。放入培養箱,消化細胞,消化時間3分鐘左右;

(4)消化完畢后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散。
加入5ml含血清的培養基,混勻后終止消化,離心(1200rpm 3min);

(5)去掉上清,加入5-7ml相應完全培養基混勻,輕輕/反復吹打細胞,接種于無菌T25瓶中(接種容器應提前用對應培養基浸潤)。

發布者:蘇州海星生物科技有限公司
聯系電話:4009906627
E-mail:hfx@dingbio.com

標簽: 細胞培養
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