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293T貼壁細胞和293T懸浮細胞生物反應器中的高密度培養方法

瀏覽次數:1451 發布日期:2024-4-15  來源:蘇州阿爾法生物
 貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在生物反應器中的高密度培養具有廣泛的應用價值。實驗中,我們使用片狀載體分別對293T貼壁細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中進行高密度培養。我們在實驗過程中采用連續灌流培養的方法,并借助片狀載體來支撐細胞的生長。通過連續觀察葡萄糖消耗,我們評估了細胞培養的增殖能力和細胞密度的變化。

實驗方法概要:
1. 需要的實驗室儀器和試劑:
   - 3.5L固定床生物反應器 x 2
   - 150g 片狀載體
   - 貼壁293T細胞
   - 懸浮293T細胞
   - DMEM培養基
   - 葡萄糖溶液
   - 無菌培養皿
   - 離心管
   - 顯微鏡

2. 貼壁293T細胞的培養:
   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基,并補充10%的胎牛血清。
   b. 將貼壁293T細胞接種在培養皿中,使其達到對數生長期。
   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。
   d. 離心細胞,去除上清液,用DMEM培養基洗滌細胞。
   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.5×107個/mL。

3. 懸浮293T細胞的培養:
   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基,并補充10%的胎牛血清。
   b. 將懸浮293T細胞接種在培養皿中,使其達到對數生長期。
   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。
   d. 離心細胞,去除上清液,用DMEM培養基洗滌細胞。
   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.3×107個/mL。
 
4. 固定床生物反應器的裝填:
   a. 準備2個3.5L固定床生物反應器。
   b. 在每個生物反應器中加入75g片狀載體。
   c. 用無菌操作將貼壁293T細胞接種在一個生物反應器中,將懸浮293T細胞接種在另一個生物反應器中。

5. 連續灌流培養:
   a. 連續灌流培養開始前,將生物反應器和培養基預熱至37℃。
   b. 確保培養基通過生物反應器的速度為1個床體積/小時。
   c. 每隔12小時,取出一定量的培養基樣品,用離心管離心10分鐘。
   d. 分離上清液并測定葡萄糖濃度。
   e. 根據葡萄糖消耗情況來調整培養基的流速,以維持葡萄糖濃度在合適范圍內。
   f. 持續進行連續灌流培養6天,每天觀察細胞生長情況和細胞密度的變化。

結果:
貼壁293T細胞和懸浮293T細胞均能在固定床生物反應器中生長。6天后,貼壁293T細胞的細胞密度達到2.5×107個/mL,懸浮293T細胞的細胞密度達到2.3×107個/mL,細胞的增殖約為50倍。

討論與結論:
   本實驗結果表明貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中均能實現高密度培養。貼壁293T細胞的細胞密度稍高于懸浮293T細胞,但差異不明顯。固定床式生物反應器的連續灌流培養方法適用于兩種細胞的培養,為后續的生物工程研究提供了可行的培養工藝。該實驗方法可為進一步研究和應用貼壁和懸浮293T細胞的生物反應器培養提供參考。
發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

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