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MIRA 和 MIRA-LFD 螺原體檢測方法的開發和應用

瀏覽次數:2131 發布日期:2024-2-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
南京師范大學海洋科學與工程學院孟慶國課題組研究了MIRA 和 MIRA-LFD 螺原體檢測方法的開發和應用。相關研究成果以“Development and application of the MIRA and MIRA-LFD detection methods of Spiroplasma eriocheiris”為題在國際學術期刊journal of invertebrate pathology在線發表,期刊影響因子為3.4。



研究背景:
中華絨螯蟹養殖已成為我國水產養殖的主導和支柱。由螺原體引起的顫抖病(TD)是中華絨螯蟹最具破壞性的疾病。因此,建立一種快速簡便的檢測方法,對疾病的預防、控制和及時治療具有重要意義。本研究構建了一種能在室溫下快速簡便檢測螺原體的核酸擴增方法-多酶恒溫快速擴增法(MIRA)和能以視覺的形式迅速讀出的方式MIRA檢測結果的MIRA-LFD。

研究結果:
本研究根據螺原體的保守基因序列,構建并篩選了合適的擴增引物。設計并標記了相關的特異性探針和所選的特異性擴增引物。然后對 MIRA 和 MIRA-LFD 反應條件進行了優化。結果表明,MIRA 和 MIRA-FFD 分別能在 37℃的溫度下用 30 分鐘和 10 分鐘鑒定出螺原體



為了研究 MIRA 和 MIRA-LFD 的特異性,選擇了三種革蘭氏陰性菌(枯草桿菌、蘇云金芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌)、三種革蘭氏陽性菌(大腸桿菌、嗜水氣單胞菌和鼠傷寒沙門氏菌)和螺原體。結果表明,MIRA 和 MIRA-LFD 對 螺原體具有高度特異性,對其他六種病原體沒有反應。
然后對比了 PCR、MIRA 和 MIRA-LFD 三種檢測方法的靈敏度。結果表明,PCR 的檢測限為 1 ng/L,而 MIRA 和 MIRA-LFD 的檢測限為 10 pg/L
最后使用優化過的MIRA和MIRA-LFD 反應體系、反應引物、反應條件,針對隨機提取的17個樣本DNA以及陽性對照與陰性對照分別進行了中華絨螯蟹螺原體MIRA,MIRA-LFD和PCR檢測. 通過分析比對不同檢測方法的結果,判斷本實驗所建立的中華絨螯蟹螺原體MIRA和MIRA-LFD檢測方法可行。



總之,本研究構建的MIRA 和 MIRA-LFD 可用于快速檢測中華絨螯蟹螺原體,具有快速、靈敏和特異性強的優點,不需要任何專業設備即可檢測到螺原體。這些檢測方法對于中華絨螯蟹水產養殖中的顫抖病控制至關重要。在這種情況下,可以及時采取早期檢測措施,避免病原體的傳播,減少中華絨螯蟹顫抖病造成的損失,從而促進水產養殖業的健康發展。
發布者:南京沃博生物科技有限公司
聯系電話:15852927017
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