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噬菌體展示ELISA鑒定的抗體選擇方案

瀏覽次數:1310 發布日期:2024-1-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

無論用什么方法制備抗體,也不論制備何種抗體。制備的抗體的功能驗證是十分重要的,而功能驗證的前提是要得到高純度的蛋白。通常我們使用的驗證功能的方法是間接法elisa檢測。間接elisa的原理這里不再贅述,但我們需要確定所用酶標抗體,這通常是表達的蛋白上所帶有的標簽蛋白的抗體。在此我們以噬菌體表面展示為例,說明抗體制備的ELISA鑒定抗體選擇。

首先對表面展示相關載體做一個介紹:

 

pADL-10 Low-Display Phagemid Vector Series:

圖1 pADL10-chart+泰克生物.jpg 

 

The phagemid pADL-20 Vector Series:

圖2 pADL20-chart+泰克生物.jpg 

pADL-100 Maximum Display Phagemid Vector Series:

圖3 pADL100-chart+泰克生物.jpg 

 

fADL Multivalent Phage Vector Series:

 圖4 fADL1 vector +泰克生物.jpg

pHAL30:

圖5 pHAL30 vector +泰克生物.jpg 

phen:

圖6 pHEN4 vector +泰克生物.jpg 

pCANTAB:

圖7 pCANTAB vector+泰克生物.gif 

這里只展示了一些載體的圖譜,但通過這些載體的組成,我們可以了解到:用噬菌體展示技術制備抗體時,選擇的噬菌體或嗜菌粒表面展示載體通常都帶有標簽蛋白——His標簽:該融合標簽是由六個組氨酸殘基組成的,可于目的蛋白的C端或N端插入,是蛋白純化最常用的標簽,可以利用鎳柱將與His標簽融合表達的目的蛋白進行純化,增加蛋白的純度。

Hemagglutinin (HA)標簽:該標簽含有9個氨基酸,序列為YPYDVPDYA,其源于流感病毒紅細胞凝集素表面的抗原決定簇,對目的蛋白的空間結構影響小, 易融合表達到目的蛋白的N端或C端。易于用Anti-HA抗體進行ELISA等檢測。

Myc標簽:該標簽含有10個氨基酸,標簽序列為EQKLlSEEDL,可融合表達至目的蛋白的N端或C端。這10個氨基酸表達在不同的蛋白質框架中仍可作為抗原表位識別其相應抗體,因此Myc tag已成功應用在 Western-blot雜交技術、免疫沉淀和流式細胞計量術中, 用于檢測目的重組蛋白的表達。

甚至有時候會帶上兩個標簽,His+HA,His+Myc,進行兩種親和層析的純化,以得到高純度、高特異性甚至高溶解性的目的蛋白。

除了標簽抗體,噬菌體表面展示有時候還會用到M13抗體,接下來我們介紹一些M13重組抗體的商品情況:抗M13 的M13 Major Coat Protein(RL-ph1, IgG2b kappa light chain單克隆克隆抗體),M13酶標抗體(Anti-M13(HRP)Antibody),M13 g8p 抗體和HRP 酶標 M13 抗體(arigo)。酶標抗體可以直接用于ELISA檢測,減少了二抗的使用,可以節約時間和成本。如果利用間接ELISA方法使用酶標二抗進行檢測,在構建載體的過程中也不需要加入標簽,可以直接進行噬菌體的ELISA檢測,也不必擔心標簽的引入對抗體表達的影響。

泰克生物具有深厚的抗體研發知識儲備,我們的科學家能為客戶提供較為系統的抗體下游工程服務,包括抗體純化,抗體配對(ELISA定制開發),抗體抗原結合動力學研究,抗體測序和抗體修飾等一站式技術服務,節約客戶寶貴時間和經費。

發布者:泰克生物科技(天津)有限公司
聯系電話:400-168-8285
E-mail:info@tekbiotech.com

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