解析Lonza 96孔電轉模塊兩大應用案例

瀏覽次數：1169　發布日期：2023-12-14　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

2023年Lonza Neclefector™技術面世22周年，成功應用于原代細胞、干細胞、神經元等難以轉染的細胞中，文獻引用量超過23,000+篇，成為基因治療、細胞治療、免疫治療研究中的一大助力。

隨著技術和產業的進一步發展，高通量核轉染的需求越來越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模塊，每塊板最多可運行96個獨立程序，非常適合于中高通量的電轉實驗，具有快速、通量高、編輯效率優秀等特點，可廣泛應用于陣列cDNA、工業生產元件、RNAi以及CRISPR文庫篩選中，是優化電轉條件、藥物靶點發現以及疫病研究的高效工具。

應用案例分享

文獻名稱：A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

應用方向：提高工業生產效率

發表期刊：Journal Of Biotechnology

發表時間：2020

研究內容：在蛋白質生產中，為了提高細胞系生產效率，往往需要針對目的蛋白（Target Protein）尋找到最合適的表達載體和培養條件。因此篩選表達載體過程中需要高通量方法（HT）高效的表達不同載體并測試其細胞性能（蛋白質生產效率及細胞生長能力），作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品，在蛋白生產細胞系CHO中實現表達載體的高效篩選。

作者報道的實際測試數據：

A. Lonza 96-well Shuttle™產品轉染效率（Transfection Efficiency）平均高達90%，且針對不同遺傳載體轉染效率差異較小

C. Lonza 96-well Shuttle™產品在隨著加大電轉質粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大對細胞活力(Growth Rate)影響較小

D. Lonza 96-well Shuttle™產品在不同批次(Replicates)電轉中，批間差異小(Coefficient of Variation)

文獻名稱：Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

應用方向：針對免疫細胞進行DNA高效轉染及RNAi篩選

發表期刊：J Immunol Methods

發表時間：2010

研究內容：針對原代免疫細胞轉染，傳統電轉往往效率低下并且會導致原代免疫細胞活化及成熟，為后續原代免疫細胞研究以及工業生產造成影響。本文中，作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品，構建針對原代樹突狀細胞（Primary Dendritic cells）高效轉染的平臺，針對難以轉染原代樹突狀細胞實現70%細胞活率及超50%的轉染效率。并利用該高效轉染平臺在原代樹突狀細胞中敲低RIG-I實現干擾素beta的下調表達。

作者報道的實際測試數據：

作者使用Lonza特異性轉染緩沖液在單核樹突狀細胞（MoDCs）測試不同程序下（Nucleoporation Program，X軸）轉染GFP的效率。可見利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系統篩選出FF137/FF168具有接近60%的轉染效率，并且保持90%以上的未成熟單核樹突狀細胞狀態。