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解析Lonza 96孔電轉模塊兩大應用案例

瀏覽次數:1169 發布日期:2023-12-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

2023年Lonza Neclefector™技術面世22周年,成功應用于原代細胞、干細胞、神經元等難以轉染的細胞中,文獻引用量超過23,000+篇,成為基因治療、細胞治療、免疫治療研究中的一大助力。
 


隨著技術和產業的進一步發展,高通量核轉染的需求越來越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模塊,每塊板最多可運行96個獨立程序,非常適合于中高通量的電轉實驗,具有快速、通量高、編輯效率優秀等特點,可廣泛應用于陣列cDNA、工業生產元件、RNAi以及CRISPR文庫篩選中,是優化電轉條件、藥物靶點發現以及疫病研究的高效工具。


應用案例分享

#1

 

文獻名稱:A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

應用方向:提高工業生產效率

發表期刊:Journal Of Biotechnology

發表時間:2020

研究內容:在蛋白質生產中,為了提高細胞系生產效率,往往需要針對目的蛋白(Target Protein)尋找到最合適的表達載體和培養條件。因此篩選表達載體過程中需要高通量方法(HT)高效的表達不同載體并測試其細胞性能(蛋白質生產效率及細胞生長能力),作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品,在蛋白生產細胞系CHO中實現表達載體的高效篩選。
 

作者報道的實際測試數據:

A. Lonza 96-well Shuttle™產品轉染效率(Transfection Efficiency)平均高達90%,且針對不同遺傳載體轉染效率差異較小

C. Lonza 96-well Shuttle™產品在隨著加大電轉質粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大對細胞活力(Growth Rate)影響較小

D. Lonza 96-well Shuttle™產品在不同批次(Replicates)電轉中,批間差異小(Coefficient of Variation)

 

#2

 

文獻名稱:Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

應用方向:針對免疫細胞進行DNA高效轉染及RNAi篩選

發表期刊:J Immunol Methods

發表時間:2010

研究內容:針對原代免疫細胞轉染,傳統電轉往往效率低下并且會導致原代免疫細胞活化及成熟,為后續原代免疫細胞研究以及工業生產造成影響。本文中,作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品,構建針對原代樹突狀細胞(Primary Dendritic cells)高效轉染的平臺,針對難以轉染原代樹突狀細胞實現70%細胞活率及超50%的轉染效率。并利用該高效轉染平臺在原代樹突狀細胞中敲低RIG-I實現干擾素beta的下調表達。
 

作者報道的實際測試數據:



作者使用Lonza特異性轉染緩沖液在單核樹突狀細胞(MoDCs)測試不同程序下(Nucleoporation Program,X軸)轉染GFP的效率。可見利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系統篩選出FF137/FF168具有接近60%的轉染效率,并且保持90%以上的未成熟單核樹突狀細胞狀態。


作者隨后測試了FF168程序在單核樹突狀細胞中siRNA轉染效率,RIG-I蛋白表達量在核轉染后顯著下調。


在全新升級的Lonza 4D-Nucleofector™ 96孔電轉模塊中,可直接與4D-Nucleofector™ 核心模塊連接使用,用于96孔格式的中通量核轉染。每塊板最多可運行96個獨立程序,非常適合于優化核轉染條件或作為中高通量篩選的有效工具。


應用

● 只需一塊板即可優化任何難以轉染的細胞
● 測試建立實驗的多個條件
● 篩選cDNA, RNAi或CRISPR、TCR文庫
● 適用于細菌轉化


優點

● 高效助力優化、篩選

每塊板最多可運行96個獨立程序,在5分鐘內自動處理

● 可拓展性

模塊化6×16 Nucleocuvette™板實現可拓展的通量

● 電轉條件可轉化性

可在不同4D-Nucleofector™模塊中,使用相同優化好的電轉條件,實現不同細胞量/通量的實驗需求

● 自動化兼容

無縫集成到自動化液體處理環境中


優化方案

4D-Nucleofector™ 96孔模塊可使用現有的96-well 電轉實驗方案或參考X-unit 20uL體系電轉實驗方案和導電聚合物96孔Nucleocuvette™板。

Lonza Knowledge Center中的Cell & Transfection Database中提供了特定細胞類型的優化方案或建議。在這些優化方案中,指出了經過內部測試的核轉染條件。此外,還會分享我們在處理特定細胞類型方面的經驗和知識,有效助力您的實驗。

發布者:上海瑋馳儀器有限公司
聯系電話:18521301252
E-mail:xiaojing.su@weichilab.com

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