腦血管疾病在全球范圍內(nèi)已成為頭號(hào)殺手，可分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中占85%。

缺血性腦卒中(ICVD)亦稱為缺血性腦血管病或腦梗死，是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，是中老年人的常見(jiàn)病，并越來(lái)越趨向年輕化。具有發(fā)病率、死亡率、致殘率、復(fù)發(fā)率高的特點(diǎn)，是目前重點(diǎn)防治的一種疾病。大腦中動(dòng)脈(MCA)為臨床上發(fā)生腦缺血損傷最常見(jiàn)的部位之一。故大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型被廣泛用于局灶性腦缺血的研究。用血管內(nèi)線栓阻斷法制備大鼠MCAO模型，已被腦血管疾病研究者廣泛接受和采用。

在栓塞后48小時(shí)內(nèi)至少有1/3患者出現(xiàn)自發(fā)性再灌注，一周時(shí)增加到一半或更多，無(wú)論是自發(fā)性再灌注還是溶栓后再灌注，都會(huì)產(chǎn)生一系列的更嚴(yán)重的級(jí)聯(lián)反應(yīng)：神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的影響、生物活性物質(zhì)引起的非細(xì)菌性炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡等不可逆損傷。所以目前動(dòng)物疾病并模型較多采用線栓阻斷

大腦中動(dòng)脈一定時(shí)間后拔出線栓引發(fā)再灌注的短暫腦缺血-再灌注模型。大鼠呼吸麻醉機(jī)進(jìn)行麻醉，仰臥固定于手術(shù)板上。右頸部備皮、清洗，縱向剪開(kāi)約3cm口，分離CCA、ICA及ECA并掛線備用，結(jié)扎ECA 與CCA , 用動(dòng)脈夾夾閉ICA 遠(yuǎn)心端后,迅速于ECA 與ICA 分叉處作一切口, 從切口處插入一端加熱成光滑球形尼龍線(直徑為0.25 mm, 距球端2 cm 處作標(biāo)記)。線插入ICA 后, 于入口處稍稍結(jié)扎尼龍線與入口處ICA 段, 然后松開(kāi)夾閉ICA 的動(dòng)脈夾, 繼續(xù)插入尼龍線至稍有阻力后略回撤, 至線插入深度為(18.5 ±0.5)mm 左右, 實(shí)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。再次結(jié)扎入口處，尼龍線外留約1cm，縫合皮膚。45min后輕輕提拉所留線頭至有阻力，實(shí)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈再灌，則造模完成。假手術(shù)組大鼠只結(jié)扎ECA與ICA。

模型狀態(tài)

造模第二日多數(shù)模型大鼠口鼻會(huì)出現(xiàn)血性分泌物，表現(xiàn)為毛發(fā)干枯，精神倦怠，蜷縮懶動(dòng)，且出現(xiàn)一定的死亡率。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠狀態(tài)好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增多，毛發(fā)變順且有光澤，體重均有不同程度的增加。
 

檢測(cè)方法

造模完成后等待大鼠蘇醒，依據(jù)Zea longa 5分制標(biāo)準(zhǔn)篩選出2分或3分的腦缺血模型進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。0分：無(wú)神經(jīng)功能缺損癥狀，活動(dòng)正常;1分：不能伸展對(duì)側(cè)前爪;2分：爬行時(shí)出現(xiàn)向左轉(zhuǎn)圈;3分：行走時(shí)身體向偏癱側(cè)傾倒;4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。

行為學(xué)指標(biāo)目前常采用跳臺(tái)法、避暗法、穿梭箱法來(lái)測(cè)定動(dòng)物一次性被動(dòng)回避反射能力 ; Y 形水迷宮實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)等測(cè)定動(dòng)物空間分辨學(xué)習(xí)記憶能力。研究血管性癡呆、腦卒中抑郁癥等可以選擇曠場(chǎng)試驗(yàn)作為行為學(xué)檢測(cè)指標(biāo)之一。

病理檢測(cè)常用HE染色觀察組織水腫炎癥反應(yīng)等，尼氏染色可以反應(yīng)神經(jīng)元細(xì)胞情況。

模型評(píng)價(jià)

水迷宮
 

在Morris水迷宮獲得性訓(xùn)練、探查訓(xùn)練和對(duì)位訓(xùn)練中，各組間大鼠游泳潛伏期、游泳距離和游泳速度指標(biāo)均無(wú)顯著差異。對(duì)位探查訓(xùn)練中，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠平臺(tái)所在象限時(shí)間百分比、平臺(tái)所在象限時(shí)間和進(jìn)入平臺(tái)所在象限次數(shù)均顯著減小(P<0.05，P<0.01);
 

曠場(chǎng)試驗(yàn)

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠穿越格子數(shù)顯著增加(P<0.05);與模型組相比，陽(yáng)性藥組大鼠穿越格子數(shù)顯著減少(P<0.01)。各組大鼠后肢站立次數(shù)和中央格停留時(shí)間均無(wú)顯著差異。

 

TTC染色

2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法觀察腦梗死灶：TTC染色后，未缺血部分呈玫瑰紅色，而腦梗死灶呈蒼白色，證實(shí)模型制作成功。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腦梗死面積顯著增加(P<0.01);與模型組相比，陽(yáng)性藥組大鼠腦梗死面積有顯著減小(P<0.01)。

TTC染色
假手術(shù)組	模型組	陽(yáng)性藥組

尼氏染色

神經(jīng)元尼氏體與細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，背景呈淺藍(lán)色。結(jié)果顯示：假手術(shù)組海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元排列規(guī)整，神經(jīng)元胞體及樹(shù)突內(nèi)尼氏體豐富;實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)元排列紊亂，并伴有細(xì)胞水腫和壞死發(fā)生，尼氏體染色較淺，模糊不清;陽(yáng)性藥組神經(jīng)元尼氏體排列較為規(guī)整，偶見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞水腫，和溶解。

附 圖
假手術(shù)組	模型組	陽(yáng)性藥組