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三種細胞活性檢測法比較:發光法、熒光法和吸光度法

瀏覽次數:2584 發布日期:2023-9-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

細胞活性檢測已成為現代實驗室的重要工具。高通量細胞活性檢測廣泛應用于篩選實驗,如化合物毒性篩選,或識別選擇性殺死癌細胞的化合物,還有一個常見用途是篩查環境毒素。

酶標儀可利用多種活性檢測試劑盒測定吸光度(Abs)、熒光強度(FI)或化學發光(Lum),以量化細胞活性。如何為自己的研究做出最佳選擇讓用戶犯了愁。

 為此,我們選取基于吸光度、熒光和化學發光讀數的三種市售細胞活性檢測試劑盒,分別是CellTiter-Glo 2.0®(Promega)、Alamar blueTM和Vybrant®MTT(均來自Thermo Fisher Scientific;圖1)。為了幫助客戶做選擇,我們使用HeLa細胞,在96孔板和384孔板中置入25-50000個細胞/孔,以建立標準曲線,對動態范圍、檢測下限和檢測上限,以及處理方面的性能進行比較。

圖1. Vybrant MTT、alamarBlue和CellTiter-Glo的細胞活性檢測原理

 

活性檢測靈敏度的比較

  如圖2所示,CellTiter-Glo的檢測下限(LOD)最低,其次是alamarBlue和Vybrant MTT。通常來講,384孔板支持檢測較低的細胞數量,是由于底物/細胞比率較高。
 
 

圖2. 使用HeLa細胞比較活性檢測試劑盒的檢測下限

 

活性檢測動態范圍的比較

 
在所有測定中都觀察到細胞數量對應的信號有明顯增強。然而,在最大濃度范圍內觀察到的線性關系隨著細胞濃度的升高而減弱(圖3A、B、C)。這種影響可能主要歸因于底物的有限。底物轉換/細胞比率在很大程度上取決于細胞類型和細胞培養條件,如FCS的可用性。在這種情況下,相對活躍的HeLa細胞使轉換/細胞比率增高,使LOD降低,但同時在高細胞濃度下產生初期飽和效應。需要注意的是,制造商提供的建議是一般指導,在必要時,應對一些參數進行檢查,提前根據您的實驗條件進行調整。有可能涉及的調整參數包括細胞總數、細胞與試劑量的比率,以及對應的孵育時間。 

圖3. 384孔和96孔板的HeLa細胞活性標準曲線。(A)Vybrant MTT,Abs(B)AlamarBlue,FI(C)CellTiter-Glo,Lum。誤差線代表8次重復

 

結論

 
BMG LABTECH的VANTAstar®酶標儀(圖4)擁有高靈敏度,可覆蓋大范圍的細胞活性檢測讀數,提供完美的檢測平臺。配備光柵和光譜儀,在波長選擇方面提供了充分的靈活性,這種靈活性同時體現在活性檢測的選擇。動態范圍擴展技術(EDR)和自動聚焦調整使分析檢測變得更加簡單,無需進行初步增益或聚焦優化。
 

圖4. VANTAstar酶標儀

 

CellTiter-Glo支持通過簡單的添加和讀取程序檢測<10個細胞/孔,而AlamarBlue提供了FI或Abs檢測兩種選擇,并且支持動力學監測,因為細胞不需要被裂解。AlamarBlue是最實惠的選擇,其次是Vybrant MTT,最后是CellTiter-Glo。
 

轉載自BMG LABTECH

 

 

 

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