常規(guī)的蛋白質分析實驗中，在電泳分離結束后，還需進行蛋白染色、轉膜、western blot 等一系列鑒定步驟。In-gel熒光檢測技術，突破常規(guī)，在電泳分離后即可進行蛋白檢測，無需染色和western blot等后續(xù)操作。由于免去了凝膠電泳后的一系列操作，不僅大幅縮減了實驗時間，有效提升效率并降低試劑耗材等實驗成本，同時還能消除轉膜、封閉過程中眾多因素的影響。

In-gel熒光檢測的技術原理在于：在凝膠中，蛋白結合復合物的遷移率與未結合的蛋白不同，可被分離開來。使用熒光基團標記其中一種蛋白，樣品中該蛋白及其結合復合物的條帶均可被檢測出來。電泳結束后，使用成像設備（如Azure多功能分子成像系統(tǒng)、Sapphire FL激光掃描成像系統(tǒng)）進行成像檢測。目前，In-gel熒光檢測在融合蛋白表達、蛋白互作分析、凝膠阻滯實驗等方面已具有廣泛的應用。

— 實驗案例：泛素化蛋白互作 —
基于In-gel熒光檢測方法，對泛素化相關過程進行實驗分析。將熒光標記的泛素（Fluorescently labeled ubiquitin，以下簡稱為FL-Ub）與E1 泛素激活酶（以下簡稱為E1）和E2 泛素連接酶（以下簡稱為E2）孵育后進行凝膠電泳分離，并使用Azure 600 多功能分子成像系統(tǒng)進行成像檢測。

方法
熒光標記的FL-Ub與E1、E2 蛋白孵育結合，通過加入非變性SDS緩沖液，分別在0.5、1、2、4、8、16、30、和60min后淬火結合反應。在非變性條件下進行電泳，每個泳道FL-Ub上樣量約200ng。

電泳結束后，進行In-gel熒光檢測：使用Azure 600多功能分子成像系統(tǒng)的 EPI 藍光光源（472nm激發(fā)，513nm采集）進行成像，即可檢測FL-Ub及其復合物。

結果
In-gel熒光檢測圖像中，可見游離的FL-Ub條帶，同時顯示，F(xiàn)L-Ub+E1、FL-Ub+E2復合物的量均隨反應時間的增加而增加（圖 1）。
 

結論
In-gel熒光檢測，通過熒光標記蛋白，無需染色和Western Blot，即可實現(xiàn)蛋白互作的可視化分析，顯著提升了實驗效率、有效降低試劑耗材等方面成本。

Azure多功能分子成像系統(tǒng)、Sapphire FL激光掃描成像系統(tǒng)為代表的尖端熒光分子成科技，除In-gel熒光檢測功能外，其在各類Blots、凝膠、磷屏、微陣列（芯片）、培養(yǎng)皿、活體成像、組織切片等多領域，均具有廣泛靈活的應用，將持續(xù)為卓越分子成像呈獻更多可能！