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鈣藍素AM實驗方案及操作步驟

瀏覽次數:889 發布日期:2023-5-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
鈣藍素AM實驗方案

操作步驟
(1)準備HHBS緩沖液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

(2)在高質量無水DMSO中制備2 mM至5 mM Calcein Blue,AM * CAS 168482-84-6 *儲備液。
(2.1)卡介素藍量,AM * CAS 168482-84-6 *使用量:1毫克
(2.2)所需濃度:2 mM
(2.3)在合適的容器中,將1mg鈣黃綠素,AM * CAS 168482-84-6 *與1074.32μL無水DMSO混合。

(3)用含有10μM鈣黃綠素的HHBS制備2X工作溶液,AM * CAS 168482-84-6 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
(3.1)Calcein Blue的終孔內濃度,AM * CAS 168482-84-6 *:5μM
(3.2)Pluronic®F-127的終孔內濃度:0.04%
(3.3)終孔內濃度的丙磺舒:1mM
(3.4)在合適的容器中混合16μL鈣黃綠素,AM * CAS 168482-84-6 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM Probenecid。然后,添加HHBS或您選擇的緩沖液,直到體積為3.2 mL。
注意:對于大多數細胞系,我們建議終濃度為Calcein Blue,AM * CAS 168482-84-6 *為4至5μM。
注意:推薦的Pluronic F-127井濃度終為0.02%至0.04%。
注意:推薦的終濃度為1至2.5 mM的Probenecid。
 
(4)將100μL染料工作溶液加入已經含有100μL培養基的所需孔中。
(4.1)此步驟將染料工作溶液從2X稀釋至1X,并將每種組分的終濃度調整為以下:5μM鈣黃綠素,AM * CAS 168482-84-6 *,0.04%Pluronic®F-127,1 mM丙磺舒。

(5)孵育染料
(5.1)將染料加載板在細胞培養箱中孵育20-60分鐘。
(5.2)將染料加載板在室溫下孵育30分鐘。
 
(6)用1.0 mM Probenecid準備HHBS緩沖液(或您選擇的緩沖液)。
在合適的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下來,添加HHBS或您選擇的緩沖液,直到體積為4 mL。
 
(7)用HHBS緩沖液或您選擇的緩沖液替換染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
(7.1)首先,從所需孔中除去200μL染料工作溶液和培養基。
(7.2)在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您選擇的緩沖液)。
 
(8)運行實驗
(8.1)為您的樣品添加所需的處理。
(8.2)以Ex / Em = 360/445 nm運行實驗。

鈣藍素,AM是美國AAT Bioquest生產的細胞滲透性鈣黃綠素,它是鈣黃綠素的細胞滲透型。進入活細胞后,弱熒光鈣黃綠素AM被水解成鈣黃綠素,其激發/發射大值與DAPI,Hoechst和AMCA相似。與典型的綠色和紅色熒光團(如FITC,TMR和德克薩斯紅)的這種特殊光譜分離為多路復用實驗提供了額外的選擇。因為鈣黃綠素AM本身是熒光的,所以可能需要適當的過濾器組和額外的洗滌步驟以使背景熒光小化。我們的鈣測定緩沖液可用于有效洗滌細胞外鈣黃綠素。

百螢 鈣藍素AM 參數:
E x(nm)       354
E m(nm)       441
分 子 量        465.41
溶    劑        DMSO
存儲條件        在零下15度以下保存,避免光照
 C A S        168482-84-6


鈣藍素AM適用儀器  
流式細胞儀
Ex:     350nm or 405nm
Em:     450/40 nm
通道:   Pacific Blue通道
 
熒光顯微鏡
Ex:     DAPI濾波片組
Em:      DAPI濾波片組
推薦孔板:   黑色透明底板
 
熒光酶標儀
Ex:          360nm
Em:          450 nm
Cutoff:      420nm
推薦孔板:    黑色透明底板
讀取模式:    底讀模式
發布者:西安百螢生物科技有限公司
聯系電話:029-68064558
E-mail:zx@tjbiolite.com

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