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科普知識:血管生成實驗前必須學會的小常識

瀏覽次數:632 發布日期:2023-2-1  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

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開始實驗前要問的問題!

我應該使用哪種內皮細胞?

皮細胞具有高度器官和組織特異性。由于這種異質性,不同內皮細胞類型的管形成時間不同。在計劃實驗時必須考慮到這一點。通常,低傳代人臍靜脈細胞 (HUVEC) 用于管形成測定。

可以應用的細胞類型的更多例子是:

  • 原代牛主動脈內皮細胞 (BAOEC)

  • 豬骨髓來源的內皮祖細胞 (EPC)

  • 人主動脈內皮細胞 (HAEC)

  • 人肺動脈內皮細胞 (HPAEC)

  • 人冠狀動脈內皮細胞 (HCAEC)

     

哪種細胞密度最適合我的實驗?

確定正確的細胞數對于從管形成測定中獲得最佳結果至關重要。細胞密度取決于細胞類型和細胞大小。在開始實際實驗之前,我們建議在非抑制條件下播種多個細胞并對管形成進行成像。創建的管數最多的細胞密度將顯示出最明顯的物質效應,因此應該用于實驗。請記住,細胞通常不會在凝膠基質上增殖。通常,我們建議每孔使用 5,000–10,000 個 HUVEC。

我應該使用哪種基質膠?

內皮細胞的管形成率取決于形成基底膜樣細胞外基質 (ECM) 表面的凝膠的類型和成分,細胞在該表面上接種。市售有幾種基底膜提取物,例如 Matrigel® 和 Cultrex®,它們均由 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤細胞分泌。在開始使用特定內皮細胞類型進行實驗之前,我們建議測試幾種基底膜物質并遵循已發布的說明。如果將在您的測定中測試促血管生成劑,則應使用減少生長因子的凝膠基質。此外,如果可能,在整個實驗中使用同一批次。

實驗中應包括哪些對照?

為了對您的結果進行正確的統計分析,包括陽性和陰性對照非常重要。作為陽性對照,在不使用任何抑制劑的情況下對您感興趣的細胞系進行管形成測定。當在生長因子減少的 Matrigel® 上用饑餓培養基培養時,內皮細胞應在數小時內顯示管的形成。作為陰性對照,可以使用不影響細胞活力的管形成抑制劑。

我的移液器工作準確嗎?它們是否經常校準?

為避免在使用 µ-Slide 15 Well 3D 時形成凝膠基質的半月板,將 10 µl 的精確量移液至內孔至關重要。此外,正確細胞數的播種非常重要。因此,有必要使用經過校準且處于完美工作狀態的移液器。我們建議用相應的凝膠潤濕移液管尖端,然后使用這一尖端填充孔。

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康寧Lambda EliteTouch移液器經過精心設計,可提供最高水平的舒適性,準確性和精確度。輕巧的結構,輪廓處理的手柄和4位數的計數器旨在確保舒適的移液,可提供試用。

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血管生成載玻片刨面圖
 

我應該在哪個時間范圍內觀察細胞?

管形成的持續時間取決于細胞類型和所使用的細胞外基質,應單獨確定。通常,HUVEC 在 2-4 小時后已經形成管。24 小時后,細胞開始發生凋亡,這會導致與基質的分離和管子的破裂。

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抑制劑隨時間對管形成的影響。
 

我應該手動還是自動監控管的形成?

如果有活細胞成像設備,我們建議使用延時視頻成像——尤其是在您不熟悉所用細胞類型的血管生成行為的情況下。在典型設置中,系統會在 24 小時內每 5-15 分鐘自動拍攝一張照片。這使得能夠精確監測管形成的進程,例如,在添加特殊物質之后。如果您已經知道管形成的大致時間范圍,也可以在預期的感興趣時間點手動拍照。

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ibidi活細胞成像系統,直接在顯微鏡上提供生理環境,在血管生成分析和管形成分析期間實現活細胞成像

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使用 ibidi Stage Top 孵育系統的活細胞成像顯示血管生成測定中 HUVEC 的管形成。

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Tube Formation FastTrack AI 圖像分析軟件,ibidi 為管形成分析的量化提供了一種省時的全自動解決方案。它包括循環計數、平均循環面積、平均管長度(每個循環)、總管長度和分支數的分析。

 

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