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酶消化法和熱修復法兩種抗原修復方法的優缺點對比

瀏覽次數:2229 發布日期:2023-2-6  來源:absin

在樣本制備的過程中,往往會應用一些試劑(如多聚甲醛、福爾馬林等)對新鮮組織進行處理,這個過程可能導致抗原位點被封閉,為了避免影響后續免疫染色的效果,我們需要先對切片進行抗原修復。對于石蠟切片來說,抗原修復是不可或缺的步驟,常用的方法有酶消化法和熱修復法。
 

1、酶消化法

作為最早的抗原修復方法,常用的消化酶有三:胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用極易受溫度影響,如果消化不足,則無法充分暴露出抗原位點,過度的消化又會破壞組織結構,影響最后陽性信號的判讀,因此在后續的發展中,酶消化法漸漸被熱修復技術所替代,但對于個別抗原,如免疫球蛋白、補體,以及在甲醛固定、石蠟包埋的腎活檢中,酶消化法依舊不可替代。
 

2、熱修復法

抗原熱修復是采用高溫、高壓方法配合合適的抗原修復液,使得被固定液封閉的抗原位點重新暴露,提高抗體的陽性檢出率。
 

最常用的抗原修復液有兩種:檸檬酸鈉緩沖液(pH=6)、EDTA緩沖液(pH=8或9),一般來說一抗的說明書都會寫明需要選擇哪種修復液。如果說明書沒有推薦,檸檬酸鈉緩沖液能夠適配大部分的抗體,EDTA緩沖液相對修復效果更強,但陽性增強的同時也會提高非特異背景,一些比較難表達的抗體可以選擇EDTA緩沖液。
 


常見熱修復方法對比

熱修復方法

微波熱修復

水浴熱修復

高壓熱修復

操作

在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于微波爐中高火煮沸,低火維持15min后取出染色盒,冷卻至室溫

在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于水溶鍋中加熱,其間不斷用溫度計測其溫度,待抗原修復液的溫度達到有效溫度(92℃↑),維持40min后取出染色盒,冷卻至室溫

在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于高壓鍋內加熱至飽壓后繼續加熱5min,關閉電源,10min后取出染色盒,冷卻至室溫

優點

加熱的時間和溫度都可以有所調整

溫和,均勻,不易脫片,對組織形態結構影響少

受熱均勻,暴露抗原位點效果好,受環境條件影響小,可重復性高

缺點

時間長,修復液容易蒸干,需要及時觀察補充;受熱容易不均勻,沸騰易導致脫片;不同微波爐功率有差異,難以標準化

需要較長時間;染色盒材料不同,熱傳導性不同,會影響加熱效果,容易出現抗原表達弱、陽性率低的結果

易導致脫片;使用高壓鍋要小心蒸汽燙傷,使用要規范謹防鍋內蒸汽過飽和引發事故

 

小愛溫馨提示,沒有哪一種抗原修復液或者修復方法能夠適配所有的抗體和樣本,最佳條件還是需要在摸索實踐中確定哦!

發布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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