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PCR蓋緊蓋子試劑蒸發問題詳解

瀏覽次數:1781 發布日期:2022-12-6  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

導讀

在PCR實驗中,我們加完反應體系后,都會認真仔細的蓋好蓋子,并反復確認已經蓋好了蓋子,以避免出現試劑蒸發的情況。可是有時候我們也會有一些疑惑:明明已經確認蓋子蓋緊了,實驗結束后,還是會出現試劑蒸發的現象。這是為什么呢?

其實試劑的蒸發是PCR實驗中常見的問題之一,影響試劑蒸發的因素也比較多。

蒸發是指試劑在PCR實驗過程中,反應液在高溫下氣化,又凝結在管壁或頂蓋上,形成水霧或水珠,或直接從管蓋或覆膜的氣隙中溢出,造成反應液濃度變化、反應液量減少,有的甚至蒸干,導致實驗無效等。

影響試劑蒸發的因素主要有以下三點:

01熱蓋壓力、溫度

在PCR實驗中,我們一般通過加熱蓋的辦法來防止試劑蒸汽的凝結,熱蓋溫度一般比反應液的溫度高,以防止蒸汽凝結。

PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種:非可調式熱蓋、可調節式熱蓋、自適應式熱蓋和自動式熱蓋。而可調節式熱蓋利用手擰壓緊式,擰不緊會發生試劑蒸發,通過增加熱蓋壓力可以盡量減少邊緣蒸發的現象。有時擰得過緊反而可能出現壓壞管子、擰壞旋鈕的情況。通常,采用電動智能熱蓋,能夠自動感應不同高度的耗材,自動壓緊耗材,壓力均勻且恒定,從而能夠減少試劑蒸發和人工誤差,提高實驗準確度和可重復性。

02耗材形變

對于蒸汽的泄漏,大部分人認為是熱蓋的壓力不夠所致。熱蓋的壓力固然很重要,但這僅僅是一個方面,其實耗材也很關鍵。

PCR 孔板通常為塑料材質,在受熱后發生膨脹,產生較大地變形,用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小,PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進而中間形成拱起狀態,從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸,造成溫度、壓力不均,引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發,影響 PCR 檢測效果。

03耗材密封不嚴

熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋,PCR 孔板質量參差不齊。優質的耗材,管口和蓋子表面光滑,盒蓋后密封性好,不易泄漏。而劣質耗材,管口不平,有徑向紋路,容易造成泄漏,甚至蒸干。

因此在PCR實驗中,盡量選擇優質、合適的耗材。同時也可以擴大反應體系,盡量減少體系蒸發對反應的影響。

發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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