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免疫組化技術專題之抗原修復的方法與步驟介紹

瀏覽次數:5882 發布日期:2022-11-1  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

眾所周知,甲醛雖然作為免疫組化常用固定劑,但甲醛也會使組織細胞許多抗原的免疫活性丟失,從而導致免疫組化染色失敗。采用特殊手段恢復組織細胞的免疫活性的方法就是抗原修復。抗原修復是免疫組化染色中的關鍵環節,也是較為復雜繁瑣的一步。

一、抗原修復的方法

FFPE(甲醛固定、石蠟切片)在水溶性介質中加熱,在組織切片脫蠟和水化后,玻片浸沒于修復液中。加熱時間和溫度直接影響修復效果。

常用的加熱方法:微波爐、高壓滅菌器、蒸汽鍋、壓力鍋和水浴箱。溫度接近100℃,加熱時間一般20分鐘就可獲得較滿意的結果,加熱后放置20~30分鐘緩慢冷卻。接下來介紹常用的高壓抗原修復法。

高壓抗原修復操作步驟:

  1. 切片常規脫蠟至水;

  2. 蒸餾水洗:3次/2min;

  3. 石蠟切片放置于高壓鍋內:8~10min;

  4. 再次進行蒸餾水洗;

  5. PBS液洗2分鐘3次;

  6. 接連免疫組化染色。


注意事項:將1500~3000ml的抗原修復液注入高壓鍋中加熱至沸騰,石蠟切片置于切片架上,放入鍋內,沒過液面以下,大概加熱5-6min,當高壓鍋開始緩慢噴氣時計時2-3min,然后將高壓鍋冷卻至室溫取出石蠟切片后按上述步驟進行。如果采用隔水式修復法,請適當將修復時間延長至10分鐘以上。

二、抗原修復操作繁復怎么辦?
免疫組化常用切片主要包括石蠟切片和冰凍切片兩種,根據樣本類型、抗體類型、切片要求等條件的不同,對應免疫組化要求也不同。同時石蠟切片在免疫組化實驗中制片步驟繁瑣,組織前處理要求高,可能破壞抗原,需要做抗原修復;而冰凍切片能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。

想要避開抗原修復這一步驟,免疫組化切片時可以選擇冰凍切片。冰凍切片雖然無需抗原修復,但在免疫組化時細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,并且切片厚度也較石蠟的厚,會直接影響切片質量。想要獲得高質量冰凍切片,選擇一臺高質量的冷凍切片機是關鍵。

三、瑞沃德冷凍切片機用于免疫組化實驗冷凍切片的優勢 

  • 緩解片子偏厚問題

  1. 壓縮機冷量輸出大可做二次溫控補償;PID控溫,使得箱體溫度在一定范圍內波動且可以自動恢復;

  2. 頂/級十字交叉導軌搭配五相高分辨率步進電機、精密絲桿和水平進樣滑塊,組成高精準進樣系統;

  3. 以上兩點保證切片無需設置過厚就能切出滿足需求的片子。

  • 緩解冰晶產生的壓力


冰晶主要產生于樣本冷凍包埋階段,因為冷凍過程緩慢從而產生冰晶,這就要求設備的冷凍效果要滿足樣本速凍需求。瑞沃德冷凍切片機速凍臺最低溫度可達-42℃,快速制冷點溫度最低可達-60℃,滿足速凍需求,同時箱體和樣本頭均可單獨制冷,從而減少冰晶產生,保證切片質量。

注釋①:建議修復液的PH僅2、6、8或10。0.01mol/LpH1或10的Tris-HCI修復液染色效果較好。

參考文獻:病理技術大講堂1001問-病理技術操作疑難點解惑答疑. 席越,陳軍主編.人民衛生出版社

發布者:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
聯系電話:400-966-9516
E-mail:rwd@rwdls.com

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