九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞活化與細(xì)胞復(fù)蘇常見的處理方法

細(xì)胞活化與細(xì)胞復(fù)蘇常見的處理方法

瀏覽次數(shù):1165 發(fā)布日期:2022-11-1  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
1.收到細(xì)胞株包裹時,請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細(xì)胞株請盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于–70°C,隔夜后,移到liq N2)。

細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:

必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。

具體操作

一.實驗前準(zhǔn)備:

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。

二.取出凍存管:

1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。

2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時核對管外的編號。

三.迅速解凍:

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。

四.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min離心3min

五.制備細(xì)胞懸液:

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。

六.細(xì)胞計數(shù):細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。

七.培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細(xì)胞情況而定。

初學(xué)者易犯錯誤:

1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。

2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。

3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。

4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。

(另:冷凍細(xì)胞解凍程序)

2.1.依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實驗。

2.2.FBS(fetal bovine serum,胚牛血清),CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對細(xì)胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。

2.3.將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。

2.4.依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.5.對絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10 ml培養(yǎng)基中,離心300 xg(約1000 rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask細(xì)胞時,處理方式為︰

1.于寄送過程中,為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細(xì)胞實驗室。

2.將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞回溫至37°C,并讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基,(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中或細(xì)胞已長滿盤,則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。
發(fā)布者:智立中特(武漢)生物科技有限公司
聯(lián)系電話:18907174295
E-mail:1730571639@qq.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網(wǎng)友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 奉化市| 昂仁县| 涟源市| 濮阳县| 常熟市| 西贡区| 济源市| 邯郸县| 武汉市| 玛纳斯县| 桂阳县| 泽州县| 临湘市| 肃宁县| 邵阳县| 台南县| 天长市| 黔西县| 临猗县| 鹤峰县| 玉屏| 嵊泗县| 乡城县| 天祝| 龙海市| 丹巴县| 张家川| 偏关县| 济阳县| 汶川县| 新源县| 霍林郭勒市| 临高县| 于田县| 焉耆| SHOW| 崇礼县| 集贤县| 上虞市| 永修县| 肥西县|