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細胞中的小黑點是如何產生的?如何避免?

瀏覽次數:2370 發布日期:2022-10-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

在正常培養細胞的情況下,我們時常會發現細胞出現一些小黑點,有些小黑點隨著細胞數量的增長而增長,有一些則不會,那么這些小黑點到底是什么?會影響細胞增長嗎?

| 細胞培養中出現的小黑點可以分為以下幾類:

1. 細胞碎片 
在細胞培養中不合適操作引起的化學或物理上的刺激,例如胰酶消化時間過長,會導致細胞死亡,從而產生很多碎片。

2. 凋亡小體 
在體外培養條件下,細胞很容易受到環境改變的影響,誘發細胞的凋亡,產生凋亡小體。

3. 血清中的沉淀
經過熱處理的血清中,作為常見沉淀物質的磷酸鈣會顯著增多,且由于布朗運動會看上去可以活動。

4. 支原體污染
由于支原體的污染,導致出現的小黑點,明顯影響細胞增長。

| 細胞培養過程中如何避免產生小黑點?

懸浮細胞:
收集細胞上清慢速離心(500~600 rpm/min,5~6 min)并更換新的培養瓶。
貼壁細胞:
將細胞用 PBS 洗 2~3 遍,洗的時候,輕輕拍打培養瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去 PBS,消化時先加低濃度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500~600 rpm/min,5~6 min)并更換新的培養瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養。

如果懷疑黑點是支原體污染,可進行支原體檢測,檢測陽性請及時將細胞處理后丟棄。比較珍貴的細胞,可以嘗試使用支原體清除劑去除,并與其他細胞分開培養。

| 注意事項:

1. 掌握細胞傳代的最佳時機,不要細胞長老了再傳代;
2. 掌握好消化時間,防止消化過度產生細胞碎片;
3. 減少血清等試劑的凍融次數;
4. 將培養液的 PH 調到最佳;
5. 嚴格控制水質和器皿的清潔。

發布者:蘇州海星生物科技有限公司
聯系電話:4009906627
E-mail:hfx@dingbio.com

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