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解析:細胞生長緩慢的原因

瀏覽次數:1290 發布日期:2022-10-14  來源:尚恩生物

就一個實驗室而言無論運作的多么好,總會因為革新技術或拓展方向二影響原來的流程,從而產生各種各樣的問題。有些地方錯誤的操作有可能帶來嚴重的后果,那么今天主要列舉細胞生長緩慢的兩大原因。

一、培養體系出現問題


01檢查你所培養的細胞是否存在污染。

(1)如果培養細胞未添加抗生素,細胞污染則是不可避免的。

① 用肉眼和顯微鏡進行檢查。

② 如果細胞被污染則要棄掉。

(2)由于支原體污染不容易覺察到,因此必須定期檢測。

(3)檢測可能污染的途徑和原因。
 

02檢查你用于培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規使用的是粉劑或10×儲存液,而現在購買的培養基更換為1×液體,而隨后證明問題就出自于此。
 

03如果問題與培養基無關,那么很可能還是細胞的問題。

(1)復蘇另一支凍存的細胞,并且與正在培養的細胞加以比較。兩種細胞的培養應分開,以免在培養之初就產生污染。隨后按(2)~(4)步的方法做排查。

(2)對傳代培養的細胞進行計數,并繪制生長曲線,與以前培養該細胞的資料進行比較,檢查是否有下列改變:

① 傳代時是否接種密度過低。

② 細胞傳代是否過于頻繁。

③ 傳代前細胞平臺期是否過長。

(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號,檢查批號和供貨商。

(4)是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞,應檢測:

① 胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長。

② 消化液的濃度和活性是否過高、過強。

③ 胰蛋白酶消化時,孵箱溫度是否過高。

④ 吹打消化細胞時是否過于用力。

⑤ 細胞是否對 EDTA過于敏感(如果添加了EDTA)。

⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。

⑦ 是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液。 
 

二、檢查共用的設備和試劑


圖片
 

溫度和孵箱濕度

01溫度設定不準

a 自動調溫器損壞。

b 開關孵箱門過于頻繁。

c 孵箱門未關緊。

d 風扇損壞造成散熱不均。

02孵箱濕度不能維持

a 水盤中未加水。

b 孵箱有滲漏。

c 開關孵箱門過于頻繁。

d 在Petri培養皿中放置一定量的PBS,每日稱重,以檢查蒸發率。

03孵箱的CO2濃度不準

a 開關孵箱門過于頻繁。

b CO2控制器出現問題。


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