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Echo Revolve顯微鏡在上皮性卵巢癌研究中的應用

瀏覽次數:1350 發布日期:2022-9-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

導讀

上皮性卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中死亡率最高的。轉移是卵巢癌患者預后不良的主要原因。表觀遺傳和蛋白質翻譯后修飾在腫瘤轉移中起重要作用。作為 IIa 類組蛋白去乙酰化酶的成員,組蛋白去乙酰化酶 9 (HDAC9) 通過使組蛋白和非組蛋白去乙酰化參與許多生物過程。

吉林大學基礎醫學院病理生理學系病理生物學重點實驗室的研究人員在Biomedicines上發表了題為《HDAC9 Contributes to Serous Ovarian Cancer Progression through Regulating Epithelial–Mesenchymal Transition》的文章。文中應用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行免疫熒光的成像。

研究亮點:

▶   對A2780 和 SKOV3 細胞中FOXO1的免疫熒光染色圖像的觀察發現, HDAC9的變化對FOXO1易位和核積累的影響,還展示了FOXO1在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

▶  對A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環蛋白的免疫熒光染色的觀察發現,HDAC9的變化對β-連環蛋白易位和核積累的影響,還展示了β-連環蛋白在A2780和SKOV3中的亞細胞定位。

▶ 免疫熒光成像清晰準確,底噪干擾小,自動進行多通道結果合成,快速得到共定位的merge圖像。

文中所有的免疫熒光結果均是使用Echo Revolve Generation 2顯微鏡進行的快速清晰的成像,揭示了HDAC9的調整對FOXO1蛋白和β-連環蛋白的亞細胞定位的影響,進而發現HDAC9可能通過上調 TGF-β 信號(HDAC9 可能通過增加 FOXO1 的核積累來促進 TGF-β 的表達)傳導促進 SKOV3 細胞中的 EMT以及HDAC9 可通過抑制 β-連環蛋白信號傳導抑制 A2780 細胞中的 EMT。

研究成果:

▲ 圖1.HDAC9 調節FOXO1蛋白在 SKOV3 細胞中的亞細胞定位。(A)Western blotting測定A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( B , C ) 轉染24 h后,通過Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中FOXO1的表達。( D , E ) A2780 和 SKOV3 細胞轉染 24 h 后 FOXO1 免疫熒光染色。(bar = 30μm)。( F , G )轉染24 h后,分離A2780和SKOV3細胞核,檢測FOXO1的表達情況。( H )Western blotting檢測HDAC3在A2780和SKOV3細胞中的表達。

在漿液性卵巢癌中,過表達的 HDAC9 可以增加 FOXO1 的核定位并促進 TGF-β 的表達。HDAC9 激活 EMT 并促進細胞遷移,這可能是由于 FOXO1/TGF-β 軸的激活。相反,在非漿液性卵巢癌中,過表達的 HDAC9 可能通過減少 β-catenin 的核積累和 β-catenin 在 Lys-49 處的乙酰化來抑制 EMT。

▲ 圖2.HDAC9 可通過抑制 β-catenin 信號傳導來抑制 A2780 細胞中的 EMT。用 HDAC9 過表達構建體、HDAC9-shRNA 質粒 (siHDAC9-1/2) 或空載體轉染 A2780 和 SKOV3 細胞 24 小時。( A , B ) A2780 和 SKOV3 細胞中 β-連環蛋白的免疫熒光染色 (bar = 30 um)。( C )分離A2780和SKOV3細胞核,研究β-catenin的表達。( D )Western blot檢測A2780和SKOV3細胞中β-catenin和ac-β-catenin(Lys-49)的表達。

原文鏈接如:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC8962438/

期刊介紹:

Biomedicines是一份國際、科學、同行評審、開放獲取的生物醫學期刊,每月由 MDPI 在線出版。主要致力于人類健康和疾病研究的各個方面、新治療靶點的發現和表征、治療策略以及自然驅動的生物醫學、藥物和生物制藥產品的研究。最新影響因子4.757,5年影響因子5.225。

發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
聯系電話:0512--86860010
E-mail:info@aperbio.com

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