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玉米粉中黃曲霉毒素檢測的高通量固相萃取方法

瀏覽次數:2534 發布日期:2022-9-1  來源:逗點生物官方微信公眾號

黃曲霉毒素(aflatoxins)是一種由黃曲霉和寄生曲霉等真菌經過聚酮途徑產生的次生代謝產物,其結構通常包含一個雙呋喃環和一個氧雜萘鄰酮,天然產生的黃曲霉毒素根據其化學結構不同分為B1、B2、G1、G2四種。

 

食品遭受產毒真菌以及霉菌毒素污染的問題在世界范圍內反復發生,被污染的農作物作為飼料資源被畜禽食用后, 攜帶的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄積,通過食物鏈傳遞, 危害人類健康。


逗點生物Copure® 226多功能凈化板
 

逗點生物采用24孔Copure® 226多功能凈化板,實現了黃曲霉毒素的快速、高通量檢測。建立玉米粉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2檢測的LC-MS/MS檢測方法。兩個水平(0.5.ng/g,1.0 ng/g)的加標回收率均在90-110 %之間,孔間回收率CV值小于5 %。

 

本方法操作簡便快捷,具有回收率高和除雜效果好的優勢,能夠作為 玉米粉中黃曲霉毒素檢測的參考方法。

 

本方法適用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅果及籽類、油脂及其制品、調味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定。

參照 《GB 5009.22-2016  食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》。


一、
樣品前處理


 

biocomma®多管旋渦混勻儀

1.1樣本提取

1)稱取 5 g試樣于50 mL離心管中,加入一定量同位素內標工作液振蕩混合后靜置30 min。

2)加入20 mL乙腈-水溶液(84+16),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20 min,在6000 r/min下離心10 min,取上清液備用。

 

1.2樣本凈化

1)將24孔凈化板放置在24孔收集板上,再向凈化板孔中加入6 mL樣品提取液。

2)將24孔凈化板和收集板放置在24孔正壓提取裝置下,開啟氣閥開關,使凈化板孔和輸氣孔保持對應,匹配良好。

3)調整氣體輸出壓力,使樣品提取液過濾至收集板中。

4)取4 mL樣品凈化液,40℃下氮氣吹干,用1 mL初始流動相復溶,渦旋 30s 溶解殘渣,過0.22 μm微孔濾膜,上機分析。

▲biocomma®24孔正壓提取裝置▲

二、儀器條件
 

儀器設備:UPLC-MS/MS

Thermo Scientific TSQ Endura

色譜柱:Thermo  C18   

2.1x100 mm, 1.7 um

流動相:A:0.1%甲酸水    B:乙腈

流動相梯度:初始80%A,20%A(0 min~2 min),20%A(2 min~3 min),80%A(3 min~3.1min),80%A(3.1min~5min)

流速:0.3 mL/min

柱溫:室溫

進樣體積:5.0 mL

質譜條件

檢測方式:多離子反應檢測(MRM)

 
表1 離子源控制條件
表2 離子選擇參數(注:*為定量離子)

三、實驗結果


 

圖1  使用多功能凈化板處理前后的脫色效果圖

①玉米粉樣品-未凈化處理   

②Copure®226多功能凈化板-凈化處理

從圖1中可知,經過Copure® 226多功能凈化板凈化處理后,提取液中色素被明顯吸附,減少雜質干擾。

 

圖2中,雜質被明顯吸附,TIC色譜圖中雜峰更少,上機液更干凈;24個孔中黃曲霉毒素的回收率均在90-110%之間,孔間回收率CV值小于5 %,能滿足實驗使用需求。



表3  玉米粉中黃曲霉毒素加標回收實驗結果





四、訂購信息

發布者:深圳逗點生物技術有限公司
聯系電話:400-878-7248
E-mail:commashop@biocomma.cn

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