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動物細胞分離培養準備工作簡介

瀏覽次數:1251 發布日期:2022-8-19  來源:武漢尚恩

動物細胞分離培養是用無菌操作的方法將動物體內的組織(或器官)取出,模擬動物體內的生理條件,在體外進行培養,人們借以觀察細胞的生長、增殖和細胞分化以及細胞凋亡或死亡的過程。因為分離的細胞沒有免疫防御系統,所以動物細胞分離操作需要比外科手術更加嚴格的無菌操作,無菌操作的原則就是保證細胞分離過程中的操作環境,使用的器械、耗材以及試劑無菌。


硬/件/準/備

01

儀器:超凈工作臺、離心機、倒置顯微鏡、培養箱、冰箱、高壓蒸汽消毒裝置、移液器。

02

器械:止血鉗、手術刀、眼科剪、手術剪、鑷子、細胞過濾篩等。所有器械清洗完以后,使用棉布包裹,捆好后濕熱滅菌。

03

耗材:培養皿、培養瓶、離心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管)、移液管、燒杯。如果購買的是無菌包裝的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材質的用品,建議使用高壓蒸汽滅菌。

04

試劑:75%的酒精、碘酒、0.9%的生理鹽水、DBSS、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液體培養基、抗血凝劑、血清、二甲基亞砜(DMSO)。所使用的液體溶劑大部分使用過濾除菌的方式保證無菌。培養基在使用前先在37℃水浴中升溫。酶儲液放置于-20 ℃,稀釋以后放在4℃中保存,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,所以不建議酶升溫至37℃再使用,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱。因為動物組織比較珍貴,建議試劑在使用前先測試是否染菌。

05

其他:冰塊、脫脂棉球、封口膜、記號筆。
 

實/驗/室/的/清/潔

實驗室一般采用照射或者熏蒸的方法消毒。熏蒸常使用過氧乙酸蒸氣進行熏蒸,再通過使用紫外照射的方法滅菌。實驗室在使用前半個小時打開紫外燈照射,雖然照射也可以對操作桌面滅菌,但因為紫外線容易被桌面上放置的物品擋住,導致桌面的滅菌受到影響,所以如有需要可以在使用前先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3%來蘇爾或0.1%新潔爾滅或0.5%過氧乙酸擦拭。紫外照射的時候也可以預先將實驗中用到的物品放到實驗臺的邊緣,進一步降低實驗中可能存在的污染風險,照射前檢查實驗中所需要的物品是否已經準備妥當(如檢查酒精燈中的酒精量是否可以保證實驗的完成),避免實驗進行中因為缺少試劑或器械而導致實驗被迫終止。

實驗人員無菌操作前需要用肥皂清洗雙手及手臂,用清水沖干凈,穿好滅菌工作服,戴好口罩和帽子,進行操作前用75%的酒精擦洗雙手,如戴乳膠手套,乳膠手套也要擦拭75%的酒精?梢詫⑾居玫木凭b到一個噴壺里面,這樣保證酒精噴灑均勻;也可以將脫脂棉球放到裝有酒精的廣口瓶中,使用時用鑷子取出棉球擦拭手和乳膠手套。

在超凈臺里面進行無菌操作時,所使用的試劑和器材在使用前應用火焰灼燒,如培養瓶的打開和擰緊的操作,一般使用酒精燈火焰灼燒。一般使用的金屬器械不能進行長時間灼燒,避免損傷器械,導致生銹;金屬器械要等到冷卻以后再取動物組織。吸取過培養基和血清的耗材不能在火焰上加熱太長時間,避免其中的蛋白等物質受熱產生有害物質,從而影響細胞的生長。

產/品/推/薦

無菌、活性、高效

【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x

【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)

【SNM-002E】DMEM高糖完全培養基(含10%血清,雙抗)
 

公司簡介

武漢尚恩生物技術有限公司坐落于武漢東湖高新區光谷生物城,專注于細胞及系列產品的研發、生產和服務,公司建有標準化GMP實驗室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質量管理體系認證,獲得高新技術企業、3551人才、瞪羚企業、科技小巨人等多項榮譽! 

公司主要研發生產細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養基、完全培養基、輔助試劑等系列產品,提供細胞及培養配套產品一站式采購;細胞庫凍存細胞系500余種,同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類;公司還提供人源細胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務等。  

公司細胞業務覆蓋國內各大高校生物實驗室、生物研究機構及一些生物科研、診斷、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供最優質的產品和服務!尚恩生物—您專業的細胞供應商!

發布者:武漢尚恩生物技術有限公司
聯系電話:17764018385
E-mail:1242926414@qq.com

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