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人非小細胞肺癌細胞通過去泛素化和穩定KLF4抑制非小細胞肺癌

瀏覽次數:2021 發布日期:2022-8-12  來源:尚恩生物

學海無涯我們文獻做舟,站在巨人的肩膀上才能看的更遠,歡迎來到尚恩生物文獻解讀時間。
 

今天我們來看看一篇關于非小細胞肺癌的文獻,首先還是了解下背景。
 

總所周知,肺癌是世界上普遍認為的死亡率最高的癌癥,沒有之一。肺癌中約有85%是非小細胞肺癌(NSCLC)。據報道,早期肺癌患者5年存活率為70%,晚期患者5年存活率不高于20%。在如此高死亡率的情況下,找到新的靶標分子對探索NSCLC治療有非凡意義。
 

之前的研究發現,泛素化涉及包括癌癥在內的多種疾病,被認為是潛在的治療靶點。OTUD1作為泛素酶的一員,是由481個氨基酸組成的,與影響諸多分子的各種生理功能有關。在乳腺癌、胰管腺癌、甲狀腺癌等均有相關研究證實其作用,還有研究發現OTUD1與改善NSCLC患者的預后有關,然而目前尚不清楚是如何影響NSCLC的發展的。本文通過研究發現OTUD1在NSCLC中下調并抑制癌細胞,還發現OTUD1可以去泛素化并穩定KLF4,這種基因在不同癌癥中可以是致癌基因也可以是腫瘤抑制因子。在本文研究中,OUTD1通過穩定KLF4蛋白抑制NSCLC的發展,為NSCLC患者治療提供了一個很有希望的治療靶點。
 

先看看作者用到哪些組織和細胞。

  • NSCLC組織和癌旁組織:獲得患者同意并通過倫理審查后,取患者組織于液氮保存備用,一共6組;

  • HBE細胞:BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞),SNL-203;

  • A549細胞:A549細胞(人非小細胞肺癌細胞),SNL-089;

  • PC9細胞:PC-9細胞(人肺腺癌細胞),SNL-152;

  • NCI-H1299細胞:NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞),SNL-223;

  • Calu-3細胞:Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞)),SNL-214;

使用到的組織和細胞還是比較多,看的出來作者還是比較希望實驗結果更加準確的。

接下來就看看作者的實驗結果吧:

以下僅展示部分細胞實驗結果(實驗結果經重新調整,非原文描述):

作者經WB檢測OTUD1蛋白表達量發現,患者癌組織中OTUD1比正常組織低(圖片b,T為癌組織,N為癌旁正常組織),細胞系檢測也發現其在癌細胞中表達明顯低于正常細胞(圖片c)。
 


 

隨后,又通過轉染方式過表達OTUD1方式研究A549與PC9細胞的功能,發現經過表達(圖片d)后,細胞增殖活力下降(圖片e),遷移率下降、侵襲能力降低(f)。



 

再通過shRNA沉默OTUD1基因(圖片g),發現沉默后的細胞增殖活力上升(圖片h),細胞遷移和侵襲能力升高(圖片i)。

 


 

通過GEPIA數據庫篩選,作者發現OTUD1與KLF4存在明顯正相關,隨后使用PC-9過表達和敲除OTUD1的細胞研究發現,敲除OTUD1發現KLF4半衰期顯著降低,但敲除和過表達的細胞中KLP4。恚遥危帘磉_量卻沒有明顯差異,說明OTUD1是通過降低KLF4的降解來穩定KLF4蛋白的。進一步的研究發現OTUD1是通過去泛素化KLF4來穩定KLF4蛋白的,限于篇幅,就不再展示了,有興趣的童鞋可以查看原文。
 

原文:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1759-7714.14320。

 

本文用到的細胞系,都是常用的肺相關細胞,除CALU-3稍微難培養以外,其他細胞都是比較好培養的:

1、BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞,SNL-203是從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞,用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆獲得的,細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性,是肺癌細胞相關實驗中常用的對照細胞;

2、A549細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-089,該細胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂,角蛋白陽性,這個細胞大概是最常用的肺癌細胞了;

3、PC-9細胞(人肺腺癌細胞,SNL-152,該細胞是取自日本患者分化型肺腺癌的細胞,生長時貼壁但仍會有部分圓形細胞,也是常用的肺腺癌細胞;

4、NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-223,這株細胞來源于一個淋巴結轉移。患者接受了初期放療。細胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表達。細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液釋放肽(GRP)。

5、Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞),SNL-214,該細胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的;該患者曾使用過環磷酰胺、博來霉素、阿霉素進行治療。該細胞接種至裸鼠可成瘤;可作轉染宿主。
 

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