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細胞培養的介紹與基本流程

瀏覽次數:1805 發布日期:2022-8-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
百趣代謝組學實驗室分享:細胞培養也叫細胞克隆術。是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定的營養條件等),使細胞生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。小趣剛剛接觸細胞的時候很慌,每天小心翼翼,生怕哪天它一不高興就給我“臉色”看。經過多年摸爬滾打,小趣終于成長為一名合格的細胞培養技術員,哈哈!今天,就和大家來聊一聊細胞培養的基本流程。
 

 
細胞培養主要涉及細胞的復蘇、傳代、凍存3個基本流程。其次才是相關的代謝組學細胞實驗(細胞轉染、增殖、凋亡、周期、免疫熒光等等),要知道良好的細胞狀態才是做好實驗的基礎。
 

01細胞復蘇
細胞從哪里來呢?一般細胞株的話從專業的細胞庫購買就可以。原代細胞需要從組織進行分離,且原代細胞分離后傳代次數非常有限,僅僅幾代狀態就開始下滑。細胞復蘇之前的準備工作至關重要。培養箱、超凈臺、槍頭進行消毒、滅菌處理(小趣使用的是一款可以高溫滅菌的培養箱,輕松了很多)。針對細胞準備特定的培養基以及高品質的胎牛血清、雙抗;此外就是細胞的“家”了!大家一定注意可不能使用劣質的培養皿/瓶,否則貼壁類的細胞不貼壁。細胞復蘇的基本流程已給大家梳理好了。

 


02細胞傳代
細胞復蘇工作完成后,就靜待細胞慢慢成長吧,細胞在生長的過程中會消耗營養,產生代謝物,培養液pH會發生變化。因此,建議48h左右進行換液,當培養板里的細胞密度達到90%左右就可以準備傳代了。

貼壁細胞常用胰酶消化法。先棄掉上清,用PBS漂洗一次后加入適量的胰酶消化液,剛好覆蓋細胞即可。不同細胞的消化時間不同,需要去摸索,第一次操作,可在鏡下多觀察幾次,當細胞與細胞之間間隙明顯,形態有變圓的趨勢時最理想(FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min)。胰酶消化完成,加入培養基中和胰酶,輕輕吹打收集細胞至離心管,離心去除上清。再次加入新鮮培養基重懸細胞,按照1:1-1:6的比例分到多個培養皿中,補充培養液后放入培養箱即可。

 

03細胞凍存
細胞凍存是重中之重,新的細胞一定要進行凍存保種,防止后續細胞傳代次數過多、狀態差、污染等問題出現時無細胞可用。細胞凍存與傳代步驟有相同之處,不同的是消化收集細胞后使用凍存液(90%血清+10%DMSO)重懸細胞,然后分裝進凍存管中,轉移至凍存盒,-80℃過夜后即可轉入液氮長期保存。

 

 
細胞的培養過程其實也沒有你想象的那么難,把握好細節,離成功就不遠了。另外,小趣也總結了一些經驗供大家參考學習。如果您有這方面的需求,我們也提供細胞相關的技術服務。
無菌意識一定要強。試劑、耗材必須無菌,操作前、后超凈臺滅菌處理
根據不同細胞特性使用不同的培養液,不建議與別人共用同一瓶試劑
培養多種細胞,操作時避免交叉污染
細胞操作時、打開培養箱取、放細胞時盡可能不要說話
文/阿趣代謝組學
發布者:上海百趣生物醫學科技有限公司
聯系電話:021-61531195
E-mail:chengyichun@biotree.cn

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