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高通量芯片點樣儀應用疫苗靶點的快速篩選

瀏覽次數:1829 發布日期:2022-5-31  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
ArrayJet高通量芯片點樣儀應用于疫苗靶點的快速篩選

通過疫苗接種獲取免疫力,仍然是目前預防傳染力強、危害嚴重疾病的有效方式,然而使用傳統方法確定疫苗的抗原靶點耗時耗力。蛋白質芯片是一種有效的替代方法,并且在通量上也具有顯著的優勢,不僅可以使研究人員簡化實驗篩選方案,而且可以加快抗原疫苗靶點的發現。

來自牛津大學的Faith Osier教授,在TED2018年11月演講中“The key to a better malaria vaccine”,講述了Arrayjet芯片點樣儀是如何幫助她的團隊分析了來自7個非洲國家,15個地區,10000個人類血清樣本,來識別針免疫抗體是通過什么方式來對抗瘧疾寄生蟲。同年12月,在Frontiers in Immunology發表如下文章。
 

惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)是瘧疾的主要病原體,其致病手段是通過裂殖子入侵宿主紅細胞,并在紅細胞內大量繁殖,而此過程中表達的蟲體蛋白和分泌的代謝產物成為關鍵的致病因子.因此惡性瘧原蟲的裂殖子蛋白可作為研發新型抗瘧疫苗的重要靶標. 

Faith Osier教授的研究團隊利用收集的10000個人類血清樣本, 篩選、合成了128種瘧原蟲重組裂殖子蛋白,使用ArrayJet Ultra Marathon 進行高通量點樣,每張玻片8064個點,即文章中命名為KILchip芯片,如圖1。

圖1:采用ArrayJet高通量點樣儀在硝化纖維素(NC)載玻片上進行蛋白點樣,玻片分為21個相同的矩陣區域,每個矩陣384個點(3 repeats),重組瘧原蟲蛋白111 samples,17 control samples,8064個點/片,點樣體積400pl,蛋白樣品濃度(250μg/ml),點樣溫度18℃,濕度50%. 

隨后該研究團隊,將高密度芯片KILchip 分別和肯尼亞瘧疾病患66個血清樣本、瑞典健康人的血清樣本,以及抗體進行孵育雜交(如圖2),其結果采用熒光芯片掃描儀進行熒光檢測(如圖3)。 
圖2:蛋白芯片放在抗原抗體反應容器中進行人血清和抗體孵育(donkey anti-human IgG-Alexafluor 647 ,室溫孵育3小時)
 
圖3左圖:蛋白芯片雜交后熒光芯片掃描儀的結果分析,篩選出IgG抗體高度結合的裂殖子相關蛋白(左圖:肯尼亞瘧疾病患66個血清樣本, 右圖:瑞典健康人的血清右圖)

通過對熒光強度的變化、數據對比和分析,快速、高效地篩選到同瘧疾相關的瘧原蟲重組蛋白,并得到經典方法ELSA的驗證,為研發抗瘧疫苗提供新的靶點。 

客戶評價
“英國ArrayJet公司不僅生產非常出色的芯片點樣儀,而且還擁有優秀的專業技術團隊,可根據客戶獨特的項目需求定制解決方案。高通量和快速的點樣方式吸引我們與Arrayjet進行合作。 在微陣列芯片設計的每一步,他們提供專業的應用服務,回答我們提出的相關問題。正是在這種出色的支持下,我們研究團隊攜同Arrayjet的芯片點樣儀,完成了諸多相關科學研究。”
—Dr James Tuju, Principal Investigator, KEMRI Wellcome Trust, Kenya

原文文章
KILchip v1.0: A novel Plasmodium falciparum merozoite protein microarray to facilitate malaria vaccine candidate prioritization.

G. Kamuyu, J. Tuju, R. Kimathi, K. Mwai, J. Mburu, N. Kibinge, M. Chong Kwan, S. Hawkings, R. Yaa, E. Chepsat, J. M. Njunge, T. Chege, F. Guleid, M. Rosenkranz, C. K. Kariuki, R. Frank, S. M. Kinyanjui, L. M. Murungi, P. Bejon, A. F?rnert, K. K. A. Tetteh, J. G. Beeson, D. J. Conway, K. Marsh, J. C. Rayner and F. H. A. Osier

Frontiers in Immunology

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