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NB4急性早幼粒細胞株的培養說明

瀏覽次數:758 發布日期:2022-4-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
   一.細胞簡介:

  細胞名稱:NB4急性早幼粒細胞株(STR鑒定)

  細胞特性

  1)來源:外周血;早幼粒細胞

  2)形態:原粒細胞,懸浮生長

  3)含量:>1x106細胞數

  4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

  5)用途:僅供科研使用。

  二.細胞的培養

  培養基及培養凍存條件準備:

  1)準備RPMI-1640培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。

  2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

  三.細胞處理:

  1)凍存細胞的復蘇:

  將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

  2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

  懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

  懸浮狀態下生長的細胞,可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態,一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL(不同細胞對密度要求不同,)可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

  3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

  下面T25瓶為例;

  1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

  2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

  3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

  四.運輸和保存

  干冰運輸及復蘇好存活細胞

  (1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

  (2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

  五.細胞接收后的處理

  1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

  2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

  3)懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。

  4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
發布者:智立中特(武漢)生物科技有限公司
聯系電話:18907174295
E-mail:1730571639@qq.com

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