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關于HPLC方法開發的幾個重要問答(Q&A)

瀏覽次數:725 發布日期:2021-8-12  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

Q1:HPLC方法開發中最大的挑戰是什么?

 

A1:最大的挑戰有兩個。第一是化合物之間的分離度問題,色譜分析的前提是分離,只有充分分離才能精確地定量(使用MS作為檢測器時對于非同分異構體等情況例外);第二是分析物色譜峰的峰形,當峰形不佳的時候(可以用拖尾因子、柱效等來衡量),也會影響分析物的定量和分離。

 

Q2:有哪些方法可以解決分離度的問題?

 

A2:1990年研究人員對這個問題進行了系統的研究,認為分離度Rs主要由三個因素決定,也就是柱效N,選擇性α和保留因子k(如下圖)。這些年來的很多技術革新都是通過提高N來提高分離度,比如設計了核殼硅膠作為色譜柱填料基質或者用UPLC儀器搭配小粒徑(亞2 μm)顆粒填料。但更根本和有效的途徑是通過改變選擇性來實現分離,也就是改變難分離的化合物與固定相和流動相之間的作用力,從下圖中也可以看到,通過改變選擇性可以有效改善分離度。

 

Q3:有哪些方法可以改變選擇性?

 

A3:改變選擇性的方法同樣很多。最重要的就是從三個角度出發:分析物本身、流動相以及固定相。對于可離子化的分析物,根據化合物的pKa針對性地改變流動相pH可以有效改變選擇性;另外,由于常用的溶劑(正相中的乙醇、異丙醇,反相中的甲醇、乙腈)之間的在氫鍵、極性作用等的差異比較大,因此改變流動相時常常也會有效改善選擇性;另外,可以根據難分離的化合物之間的差異,針對性地選擇可以識別這些差異的色譜柱,比如π-π作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用、疏水作用、離子交換作用、形狀選擇性等,通過選擇合適的色譜柱往往也能達到出奇制勝的效果。

 

Q4:峰形問題有哪些原因和解決辦法?

 

A4:解決峰形問題最關鍵的是找對原因。造成峰形問題的原因有很多,但是大部分是化合物本身的原因,比如含有與固定相產生強作用的基團(如含N的堿性基團、螯合基團等),或者含有在某些流動相條件下會互變的基團等。至于解決辦法,就需要對癥下藥,比如對于前者就需要在流動相中加入添加劑或者選擇更“惰性”的柱子,對于后者就需要選擇更合適的流動相條件。

 

Q5:星譜科技所提供的色譜柱有哪些優勢?

 

A5:星譜科技目前主要提供英國Horizon公司的色譜柱,這些色譜柱的主要優勢有三個:第一,它的多款色譜柱具有獨特的選擇性,在解決分離度問題方面很有優勢,比如C18/AR、C18/PFP和amide 18等復合型固定相設計,可以在保留C18疏水性的基礎上引入比如π-π作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用等;第二,幾乎所有的這些鍵合固定相都有核殼硅膠基質類型填料可供選擇,保證在好的選擇性的同時具有高柱效,從而獲得更好的分離度;第三,Horizon色譜柱選擇的硅膠都是超純、超惰性的硅膠,可以盡量降低因分析物和硅膠表面的作用而造成的峰形問題。總結來說,Horizon色譜柱是解決色譜分析中分離度和峰形問題的利器。同時,星譜科技的技術人員對色譜柱也有深刻的理解,因此可以根據用戶的具體項目需要更精準地推薦色譜柱,節約方法開發的時間。


發布者:廣州星譜科技有限公司
聯系電話:020-31801380
E-mail:info@starchrom.com

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