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BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的優缺點對比

瀏覽次數:10861 發布日期:2021-8-11  來源:蘇州阿爾法生物官網

目前實驗室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三種: BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 


BCA 蛋白定量 的實驗原理是在堿性條件下,H | NH2----C-COOH | R 將Cu²+還原為CU+與 BCA 結晶為紫色的化合物,再通過測定 562 nm波長OD值來判定還原劑的含量。


下列表分別對兩種實驗方法做以對比:



通過上表中的的對比,我們不難看出Bradford實驗法的速度比較快,平常BCA 蛋白定量 的孵育時間大約30分鐘甚至更長,而采用Bradford蛋白定量法則需要幾分鐘即可完成實驗。


雖然其標準曲線的線性擬合程度不如BCA定量法,但它的二項式契合度卻較高。
(下圖顯示為:二項式的標準曲線制作方法)



除此之外,Bradford 蛋白定量還有一個小小的缺陷,那就是它比較容易受高濃度的去垢劑影響,比如需要SDS的實驗濃度低于0.01%,TRITON X-100的實驗濃度低于0.005%等。
解決的辦法是:使用與Bradford 兼容的去垢劑,從而匹配到相應的實驗濃度即可。

Bradford蛋白定量實驗雖然實驗在制作二項式標線和公式計算較繁瑣,但如果能成功破解以上三個問題,那么Bradford法對比BCA法來說還是有不少優勢的,比如可以節省很多時間等。對于追求實驗效率的實驗員來說,熟練掌握Bradford實驗法是個不錯的選擇。 

發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

標簽: 蛋白定量
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