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其它動物細胞株操作步驟與注意事項

瀏覽次數:1386 發布日期:2020-12-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
其它動物細胞株注意事項: 

(1)欲冷凍保存之細胞應在生長良好(logphase)且存活率高之狀態,約為80–90%致密度。 

(2)冷凍前檢測細胞是否仍保有其特有性質,例如hybridoma應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。

(3)注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級,無菌且無色(以0.22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品,如Sigma D-2650),以5~10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級,以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 

其它動物細胞株操作步驟為:

 (1)選擇處于對數生長期的細胞,在凍存前一天蕞好換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。

 (2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養基,于4℃預冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為3×106~1×107/mL之間。

 (3)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)。

 (4)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時,再移至冰箱冷凍室內3~4小時(此步可省略),再吊入液氮容器頸氣態部分存放2小時,蕞后沉入液氮中。
發布者:上海博湖生物科技有限公司
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