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Naica™ Crystal數字PCR在造血干細胞移植后嵌合狀態檢測的應用

瀏覽次數:2156 發布日期:2020-11-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

背景導讀—何為嵌合狀態的檢測?

骨髓和外周血干細胞移植是許多惡性和非惡性疾病的有效治療方法。造血干細胞移植后,受體產生新的血細胞,這些血細胞在遺傳上來自于供體DNA。確認新的造血系統來源于供體是臨床復發監測的重要組成部分。一般采用血細胞基因型檢測的方式,稱為嵌合體分析。完全供體細胞嵌合狀態意味著100%的血細胞來自供體,而混合或部分嵌合意味著受體細胞也存在。因此檢測時需要分析受體在移植后的血液或骨髓中供體和受體的基因型的各自比例。

法國蘇黎世輸血服務中心實驗室使用Stilla Technologies的Naica™ Crystal數字PCR系統進行雙等位基因單核苷酸變異(SNV)檢測,從而確定嵌合體狀態。

嵌合體檢測的兩步策略

移植前:要想得到正確的移植后的檢測結果,必須選擇合適的標記物,蘇黎世輸血服務中心實驗室建立了一個由24種特定SNV分析組成的組合,用于尋找在單個樣品分析中篩選供體和受體DNA的合適標記。

移植后:在臨床上,嵌合體監測至少需要0.5%的等位基因敏感性。Naica™ Crystal 數字PCR僅使用5ng DNA,就達到了所需的0.5%的靈敏度。使用標準的20ng DNA進行檢測可以使一個等位基因頻率的可重復量化精度達到0.25%。(圖2)

總結

Naica™ Crystal數字PCR在造血干細胞移植后嵌合狀態檢測方面的優勢:

☑  可與建立的SNV嵌合體檢測方法完全兼容。

☑  使用Naica™系統進行的標準測試可使等位基因頻率檢測靈敏度降至0.25%,遠低于0.5%的最低臨床限值要求。

☑  此次研究,使用了Naica™系統中的高通量Opal芯片,一次可檢測48個樣本,每個樣本可進行3熒光通道讀取,僅需較低的DNA輸入量,即可實現更高的樣品通量和譜系特異性嵌合體檢測的能力。

發布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
聯系電話:0512--86860010
E-mail:info@aperbio.com

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