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切向流過濾的脫輔基血紅蛋白的制備新方法

瀏覽次數:1432 發布日期:2020-3-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

 一種基于切向流過濾的脫輔基血紅蛋白制備新方法

來自美國俄亥俄州立大學等的科學家們在2020年第117期的《Biotechnology and Bioengineering》雜志上發表了題為“Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties”的文章。文中,研究人員開發了一種新的、可放大的脫輔基血紅蛋白(apoHb)生產方法,使用酸化乙醇溶液將疏水性血紅素提取到溶液中,并通過切向流過濾將血紅素從獲得脫輔基蛋白中分離出來。結果顯示,獲得的總蛋白和活性蛋白產量分別為>95%和~75%,且apoHb制備液中殘留的血紅素<1%,SDS-PAGE分析顯示純度>99%。

實驗使用KrosFlo KR2i 切向流過濾系統中空纖維過濾組件。從HB生產apoHb的工藝現在表面積20cm2的MicroKros TFF過濾器上進行,然后規模放大到表面積1050cm2的MiniKros TFF過濾器。在兩種規模條件下,中空纖維均為聚砜材質,MWCO 10kD,內徑0.5mm,長度20cm。純化的oxy-Hb(低于5% metHb)添加到含有3 mM HCl的80%(v/v)EtOH/DI水混合液中,獲得最高蛋白質濃度2mg/mL。對于使用MicroKros過濾器進行的實驗,處理18 mg Hb,流速設置為25 mL/min。對于MiniKros過濾器實驗,流速設置為1.1L/min,包括3個起始量為1g Hb的批次、3個1.2g Hb的批次以及8個2.0 g Hb的批次(以兩根平行的HF組件運行)。跨膜壓維持為7±1psi。Hb分散于酸性乙醇溶液后,系統以酸性乙醇連續洗濾9個體積。血紅素去除后,無血紅素的球蛋白以DI水洗濾5個體積,再以PBS洗濾5個體積。在MiniKros生產規模,進行最終濃縮步驟,將系統體積降低至最終總蛋白濃度40-115mg/mL。整個工藝在4±1℃的冷室內進行。每次運行后,TFF組件使用DI水徹底漂洗,再以0.1M NaOH 消毒,并保存在0.1M NaOH中。再次使用前,用DI水充分漂洗,以去除保存液。

詳細內容,請參考原文。

原文:I.S.Pires, D.A.Belcher, R.Hickey, et al., Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties. Biotechnology and Bioengineering, 2020, 117(1): 125-145.

 


KrosFlo®  KR2i 切向流過濾系統


 

KR2i 工作原理


KR2i 主要部件

 
KR2i ProConnex流路 


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