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基于細菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯疫苗的制備

瀏覽次數:1871 發布日期:2020-3-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

基于細菌外膜囊泡的H1N1/冠狀病毒雙聯疫苗的制備

來自德國吉森大學等的科學家們在2019年第7期的《Vaccines》雜志上發表了題為“Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV”的文章。文中,研究人員開發了一種基于細菌外膜囊泡(OMV)的疫苗,其可遞呈甲型流行性流感病毒(H1N1)2009株(H1N1pdm09)H1型血凝素(HA)和中東呼吸道綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)受體結合結構域(RBD)的抗原性穩定嵌合融合蛋白,縮寫為OMVs-H1/RBD。研究結果表明,嵌合抗原可誘導對抗兩種毒株的特異性中和抗體,免疫的小鼠可形成針對H1N1pdm09的保護,并有效中和MERS-CoV。所以,可認為,遞呈病毒性抗原的OMV疫苗是一種對抗兩種不同病毒感染的安全、可靠的方法。

實驗操作中,E.Coli DH10β菌轉染pMP-H1/RBD質粒,LB瓊脂糖平板克隆篩選,接種至5mL 液體LB,培養16h,然后培養液接種至大體積培養。

OMV通常從轉染的E.Coli DH10β細胞的上清液純化。操作時,2L的DH10β培養液于37℃ LB肉湯中搖瓶培養,直到對數生長期(OD600nm 1.0)。生產的細菌離心,上清液使用0.22μm過濾器過濾,去除殘留的菌體。之后,無細菌的上清液用KrosFlo KR2i 切向流過濾系統100kD中空纖維膜超濾濃縮至終體積30mL。獲得濃縮液進一步4℃ 150,000xg超速離心3h,分離OMV餾分。之后,含有OMV的沉淀重懸于300μL PBS,除菌過濾,并于-80℃儲存。

為對含有嵌合HA/RBD抗原的OMV進行鑒定,使用免疫印跡分析確定OMV中存在MERS-CoV的RBD和H1N1pdm09的H1-HA,并確認存在連接RBD的HA病毒蛋白,其分子量與HA0-RBD之和相當。

原文:M.M.Shehata, A.Mostafa, L.Teubner, et al., Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV. Vaccines, 2019, 7(46), doi:10.3390/vaccines7020046.


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