九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本
English
|
中文版
|
手機版
企業登錄
|
個人登錄
|
郵件訂閱
首頁
行業資訊
產品目錄
新品關注
廠商名錄
會議展覽
技術服務
技術文章
人才招聘
視頻精選
供求論壇
二手交易
儀器
儀器
二手
試劑
耗材
廠商
服務
維修
資訊
文章
視頻
全站
當前位置 >
首頁
>
技術文章
> 對完整和空殼腺相關病毒(AAV)顆粒進行色譜分離的新突破
選型
|
市場
|
應用
|
使用
|
法規
|
技術
|
其他
對完整和空殼腺相關病毒(AAV)顆粒進行色譜分離的新突破
瀏覽次數:7574 發布日期:2019-10-30 來源:本站
僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
❀
AAV載體的應用現狀
基于腺相關病毒(AAV)的各種血清型載體被公認在人類基因治療和基因疫苗接種應用中具有高潛力。在制造AAV載體期間,不必要的,不完全的顆粒共同產生。它們缺乏重組病毒基因組,僅由空衣殼蛋白組成。空衣殼增加了用于醫學應用的AAV病毒的所需劑量,并且被認為引起針對載體衣殼的免疫反應,導致不必要的副作用。因此,在制造過程中去除空衣殼以及量化制劑中空AAV顆粒含量的能力是任何AAV生產過程的關鍵要求。
❀
制備AAV載體的常規方法
目前用于制備分離空衣殼(CsCl或碘克沙醇梯度)的方法對于放大是具有挑戰性的并且不適合于大規模生產。此外,用于檢測空衣殼的分析方法和全空粒子比的測定(電子顯微鏡(EM)測定,總粒子測定[ELISA]結合基因組拷貝滴定[qPCR])耗費時間和勞動力,受操作者的影響技術或不提供用于不同血清型AAV的容易獲得的試劑。
❀
新突破
本應用簡報介紹了利用微小電荷差異分離全空和空AAV8顆粒的新方法。通過在BIA Seperations 的CIMmultus™ QA Monolithic column整體柱上使用線性梯度洗脫,引入了用于分析AAV顆粒的簡單,快速和可重復的分析。該方法成功應用于通過兩種不同制造工藝制備的AAV8顆粒。
材料與方法
通過CsCl梯度離心制備純化的完整和空AAV8載體顆粒的病毒制劑。
通過切向流過濾(TFF)然后通過碘克沙醇梯度進行AAV8的替代制備。
結果
電子顯微鏡
通過電子顯微鏡分析AAV8制劑制劑中完全和空顆粒的存在。 空殼用箭頭表示(圖1)。
全衣殼和
空殼
AAV顆粒的色譜分離
用完整和空AAV8載體顆粒的CsCl梯度制備物進行初始結合 - 洗脫實驗。 線性鹽梯度下的不同保留體積表明可以對全載體和空載體顆粒進行色譜分離(數據未顯示)。
基于這些結果,將全粒子和空粒子的混合物應用于CIMmultus™ QA Monolithic column整體柱(圖2)。 將任意體積的75μL空衣殼制劑與1×10 12 GC的含有93.7%完整AAV載體顆粒(通過EM測量)的制劑混合(圖2)。
檢測到代表空衣殼和完整衣殼的明顯可區分的峰。 后來的洗脫峰含有> 99%的負載的全顆粒(通過qPCR測定)。 空衣殼的計算相對量(根據測量的峰面積)為34%(圖2)。
然后使用AAV8衣殼的色譜分離來分析不同AAV制劑中的全粒子與空粒子比率。 基于色譜峰積分,通過CsCl梯度(通過EM測量的93.7%飽和度)對AAV制劑的定量導致空 - 滿比率為0.016(1.6%空顆粒),而0.067(空顆粒為6.28%) 由EM分析確定(數據未顯示)。
通過替代方法產生的AAV顆粒的色譜分離和定量
接下來評估基于CIM QA的分離和定量的適用性,用于替代的AAV制備(通過TFF制備,隨后是碘克沙醇梯度)。 將含有相當于5×10 12 GC的AAV制劑加載到CIMmultus™ QA Monolithic column上,并用線性梯度洗脫分離,如色譜圖所示(圖3)。 與由CsCl制備的AAV相比,加載的AAV顆粒多5倍(圖2),這導致洗脫峰變寬。 在20.0分鐘洗脫的次要峰的峰面積與在22.2分鐘洗脫的主峰的積分(圖3)表明空 - 滿比為0.026(2.5%空顆粒),與EM獲得的比例很好地一致( 空 - 滿比率為0.05;空顆粒為4.5%)。
為了證明該方法對不同AAV生產過程的適用性,AAV樣品摻入空顆粒制劑,使用相同的梯度條件注入CIMmultus™ QA Monolithic column(圖4)。
分離和定量AAV顆粒(TFF和碘克沙醇梯度),加入空衣殼AAV
❀
結論:
開發了一種快速,可重復的方法,用于在CIMmultus™ QA Monolithic column上通過線性梯度洗脫分離和定量空顆粒和全顆粒AAV8載體。 該方案成功地用于兩種不同的AAV制劑,并且能夠定量空衣殼含量,這與替代方法一致。 色譜方法的優點是簡單,快速,不依賴于操作員技術和需要專門的試劑。 相反,它在單次測定中提供粒子特征的定量分析,運行時間為30分鐘。
更多細節請參考下列文獻:
1. M. Lock, M. R. Alvira, J.M. Wilson: Analysis of Particle Content of Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 8 Vectors by Ion-Exchange Chromatography. Human Gene Therapy Methods: Part B 23:56-64 (2012)
如需更多信息,請聯系我們:
索取資料
發布者:
上海泰耳光電有限公司
聯系電話:021-64386213
E-mail:
devin@teolinc.com
【
點擊可查看 上海泰耳光電有限公司 相關產品
】
標簽:
色譜柱
分享到:
QQ空間
新浪微博
騰訊微博
微信
【
所有文章
】 【
本類新聞
】 【
相關產品
】 【
關閉窗口
】
用戶名:
密碼:
匿名
快速注冊
忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼:
8795
更多
本類文章
XP HILIC-Z色譜柱在糖醇、氨基酸/堿基及有機酸檢測中的應用
賽默飛液相色譜柱助力精準選擇化學藥品
應用案例:參照國家修訂草案使用色譜柱對川芎含量測定
應用案例:利用色譜柱對法羅培南鈉有關物質的測定
MicroPulite® SP Sugar色譜柱在中藥含量測定分析中的應用
應用案例:利用色譜柱對聚維酮K30中2-吡咯烷酮/甲酸進行測定
RediSep®反相C18、C18Aq和C8色譜柱使用、清潔及存儲指南
應用案例:利用色譜柱對阿替洛爾的含量測定
更多
本類新聞
國貨當自強!微純國產替代色譜圖有獎征集活動開始啦
博格隆新品EzSelect 預裝柱助力高通量篩選
賽默飛發布550 SEC色譜柱,新用戶禮遇價9999元/支
招聘:微純生物科技誠聘出口銷售經理、國內銷售經理
展會邀請:微純生物邀您參加CPHI&PMEC China 2024
新品:微純推出Upulite系列防腐劑和著色劑專用柱
新品:普瑞邦多功能柱后衍生系統全新換代升級
賽默飛Accliam液相色譜柱達人征集令活動重磅來襲
相關推薦
BRAND移液器、分液器、助吸器促銷,買即送吸頭等耗材
PIPETBOY GENIUS搭配INTEGRA血清移液管,等分更快_吸取更安全_移液更智能
2025 CPHI & PMEC China生命科學與生物醫藥主題聯展報名即將截止!
免費票即將截止!PMEC包裝與給藥系統展區邀您6月共聚上海
德國BRAND移液器夏季優惠,原裝進口耗材免費送
PMEC China 2025實驗室儀器與裝備展區免費門票限時領
單細胞分選 - 微重力活細胞培養 - 基因轉染 - 組織、細胞、線粒體能量代謝 全方位解決方案
德國BRAND移液器大促,原裝進口耗材免費送
貝克曼庫爾特生命科學AMPure XP免費試用限時回歸
開年大促活動來襲,BRAND移液器 買就送!
關于我們
|
法律聲明
|
廣告報價
|
English
|
網站地圖
Copyright(C) 1998-2025
生物器材網
電話:021-64166852;13621656896
E-mail:
info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板:
白银市
|
阿拉善左旗
|
浦北县
|
广南县
|
乐山市
|
湖北省
|
镇江市
|
麻阳
|
旬邑县
|
黄平县
|
泰和县
|
昌江
|
会理县
|
大田县
|
九龙城区
|
上思县
|
龙井市
|
泾源县
|
登封市
|
东乌珠穆沁旗
|
聂拉木县
|
桓台县
|
麻阳
|
祁东县
|
枣强县
|
饶平县
|
柳林县
|
水富县
|
锡林郭勒盟
|
马尔康县
|
南京市
|
德钦县
|
达拉特旗
|
阿坝县
|
焉耆
|
吉水县
|
浪卡子县
|
浦江县
|
雅安市
|
塘沽区
|
如皋市
|