各位看官晚上好，一期一會的百奧賽圖知識擴展課堂又來嘍，今天小編帶來一種視覺享受的分子，言歸正傳，GITR（glucocorticoid-induced TNFR-related protein）是TNF受體超家族成員 ，在多種腫瘤模型中可表現(xiàn)出抗腫瘤效果。GITR是目前免疫學(xué)家感興趣的一種共刺激免疫檢查點分子。

那么接下來，咱們就一起瞧瞧這個因吹斯汀的靶點分子吧~

 

基因功能簡介

TNFRSF18（TNF受體超家族成員18）也稱為糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR相關(guān)蛋白（GITR），其在包括T細胞在內(nèi)的許多免疫細胞上表達。作為T細胞的共同刺激信號，TNFRSF18在T細胞活化后被上調(diào)，進而促進T細胞增殖。已知CD25⁺/CD4⁺調(diào)節(jié)性T細胞可介導(dǎo)免疫耐受，而GITR激動劑抗體可逆轉(zhuǎn)這種免疫耐受，并在多種腫瘤模型中顯示出抗腫瘤作用。

 

 

Figure 1：Model of GITR–GITRL interaction dynamics during an immune response.

 

目前，GITR是免疫學(xué)家熱衷研究的共刺激檢查點分子，參與抑制Treg細胞的抑制活性，并延長效應(yīng)T細胞的存活。百奧賽圖開發(fā)的B-hTNFRSF18(GITR) mice人源化小鼠為科學(xué)家們研發(fā)該靶點抗體藥物的有效驗證提供了有力的工具。

 

品系信息

 

 

qRT-PCR分析

 

通過qRT-PCR技術(shù)分析肝臟組織的的GITR基因在 mRNA水平的表達情況。

在C57BL/6與B-hGITR小鼠中，GITR基因表達并無顯著性差異(n=3)。

 

蛋白表達分析

   

通過流式細胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6中可檢測到小鼠GITR⁺細胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測到人GITR⁺細胞。

 

通過流式細胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的Treg細胞。

在WT C57BL/6中可檢測到小鼠GITR⁺細胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測到人GITR⁺細胞。

 

B-hGITR小鼠的白細胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術(shù)測試白細胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hGITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響T，B，NK，粒細胞，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術(shù)測試白細胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hGITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。

 

GITR抗體藥效驗證

 

將鼠結(jié)腸癌MC38細胞皮下植入雜合的B-hGITR小鼠中。

 

當(dāng)腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝6）時，將小鼠分組。三種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長，證實B-hGITR小鼠模型是體內(nèi)GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

將鼠結(jié)腸癌MC38細胞皮下植入純合的B-hGITR小鼠中。

 

當(dāng)腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝5）時，將小鼠分組。兩種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長，證實B-hGITR小鼠模型是體內(nèi)GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

B-hPD-1/hGITR mice

 

蛋白表達分析

通過流式細胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測到小鼠PD-1⁺ T細胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測到人PD-1⁺ T細胞。

通過流式細胞術(shù)分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測到小鼠GITR⁺ T細胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測到人GITR⁺ T細胞。

 

B-hPD-1 / GITR小鼠的白細胞亞群分析

  

脾臟白細胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術(shù)測試白細胞亞群的比例。 

結(jié)果表明，純合B-hPD-1/GITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hPD-1/hGITR的人源化不影響T，B，NK，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。

血液常規(guī)測試

 

 

血液常規(guī)測試

 

收集來自C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）的血液，并通過血液常規(guī)測試進行分析。結(jié)果，MCV中的C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間存在顯著差異。

 

血液生化測試

   

測試了C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠的血清AST/ALT水平（n=3）。結(jié)果表明，C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間沒有顯著差異。

 

PD-1 Ab聯(lián)合治療與GITR Ab療效評估-1

   

將鼠結(jié)腸癌MC38-hPD-L1細胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當(dāng)腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時，將小鼠分組。與對照組相比，所有實驗組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。 

 

PD-1 Ab聯(lián)合治療與GITR Ab療效評估-2

   

將鼠結(jié)腸癌MC38-hPD-L1細胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當(dāng)腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時，將小鼠分組。與對照組相比，所有實驗組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

參考資料

Ethan M Shevach, Geoffrey L. The GITR–GITRL interaction: co-stimulation or contrasuppression of regulatory activity?  Nature Reviews Immunology 6: 613–618 (2006)，dol:10: 1038/nri1867