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如何確定數字PCR的LOB?

瀏覽次數:4197 發布日期:2019-5-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
數字PCR技術是一項新的核酸檢測和定量技術。空白檢測限LOB (Limit of Blank)是判斷數字PCR技術檢測能力的重要參數。
LOB(the limit of blank)是一項統計學實驗參數。在可信度大于95%的概率下,對于不含有分析物的樣品(空白樣品),LOB是可能觀察到的最高檢測結果。換句話說就是最大的假陽性數。
為什么要在數字PCR中計算LOB ?
在數字PCR (dPCR)中,多種因素可以引起假陽性。定量核酸時確定假陽性的cutoff對dPCR檢測的穩定性至關重要。為了定義這個cutoff,檢測閾值通常設置在LOB值之上,而在檢測校準期間必須首先為每個目標確定空白LOB值。此外,實驗LOB值對于判斷反應是正還是負以及計算LOD值都是必要的。
95%置信度LOB如下表所示:
R:重復次數,一般≧30
μ和α:分別為假陽性個數的平均值和標準方差
μcorr:校正平均值
當μ=0(即假陽性永遠不會出現),則LOB(95%)=0
當LOB為非零時,可以用概率分布加權的“減去假陽性”的方法來校正實驗樣品中目標核酸的量。
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