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ACE HILIC色譜柱方法開發指南Ⅱ - HILIC的分離機制

瀏覽次數:7714 發布日期:2019-4-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
HILIC分離機制

HILIC是一種復雜的分離技術,通過多種相互作用模式來實現保留。

這些相互作用的權重(中哪種是主要作用)是基于固定相、流動相和分析物的理化特性。

為了得到可靠和穩健的HILIC方法,了解潛在的不同相互作用(了解可能存在的不同相互作用)是很有幫助的。

這樣可以為待進行的方法開發合理選擇色譜柱和條件。(這樣可以為方法開發的色譜柱和條件做出合理的選擇)
HILIC中的流動相通常包含大量的乙腈(>70%)以及至少3%的水。

水性組分使得極性固定相周圍存在親水環境,并且形成吸附水層以便分析物分散(分配)。

主要的HILIC保留機制包括:
分析物分散(分配)到吸附水層,各種極性相互作用和靜電(即離子交換式)相互作用(參見圖3)。

如果將極性分析物通入(極性分析物進入)HILIC環境中,則可使用這些保留機制中的任意一種(則物質的保留可能是任何一種機制作用,也可能是所有機制同時作用)。

圖3
潛在HILIC保留機制圖示

極性分析物通常包含能夠與其它極性基團相互作用的各種基團,如:固定相上的基團。極性相互作用包括氫鍵和偶極-偶極與其它基團的相互作用。帶

電分析物也可以進行靜電或離子交換式相互作用,其中分析物可以被固定相吸引或排斥。

例如,一個帶負電的或酸性的分析物會被帶負電的(即酸性的)固定相排斥。

但是,帶正電的或堿性的分析物可被帶負電的(酸性的)固定相保留,反之亦然。

 

ACE HILIC色譜柱固定相:

過去,許多HILIC固定相都采用非鍵合硅膠。

這些酸性相提供了必要的相(固定相必要的)極性,以在(使其能)HILIC模式中與高有機物含量洗脫劑很好地相互作用。

非鍵合硅膠相很有(好)用,所以仍在廣泛使用。

最近,在市場上已經可以買到專門用于HILIC環境的各種鍵合相(固定相)。

這些新的極性鍵合相根據相(固定相的)特性可分為很多種,包括酸性的、堿性的、中性的和新型的化學相。

ACE HILIC組合目前包括酸性的、中性的和堿性的固定相。

這些相已被證實可相互提供不同的選擇性。
這些(三款)ACE相(固定相)彼此提供了替代選擇性,可參見圖4.九種組分混合物中的中性和帶電分析物,在相同條件下,對三種不同的ACE HILIC相(在三款不同固定相的ACE HILIC色譜柱上)顯現出不同的保留和洗脫順序。

這清楚地表明:HILIC模式下各ACE HILIC固定相之間存在選擇性差異,使得這三種色譜柱成為HILIC方法開發的理想選擇。

圖4
ACE HILIC固定相范圍內洗脫順序的對比
色譜柱:150 x 4.6 mm, 5 μm
流動相:10 mM甲酸銨,pH4.7(溶于MeCN/H2O中)(90:10 v/v)
流速:1.5 mL/min
溫度:25 °C
檢測:UV, 254 nm
樣品:
1) 對氨基苯甲酸
2) 4-羥基苯甲酸
3) 煙酰胺
4) 醋丁洛爾
5) 腺嘌呤
6) 扁桃酸
7) 酪胺
8) 阿替洛爾
9) 2’-脫氧鳥苷

 

ACE HILIC-A相

ACE HILIC-A相能形成負電荷,并顯示出高(強)陽離子交換能力。

帶電的堿基(堿性物質)對ACE HILIC-A相進行(產生)靜電吸引,而帶電的酸性物質則被排斥。
ACE HILIC-A相的帶電程度取決于流動相的pH值。

ACE HILIC范圍的推薦pH限值為pH2.0到pH7.0。

通過增大pH值,固定相上的負電荷將變得更明顯,從而保留更多的陽離子分析物。

 

ACE HILIC-N相

中性ACE HILIC-N相對陰陽離子都顯示出較低的離子交換能力。

ACE HILIC-N相的保留機制包括極性相互作用、吸附和一定程度的分散(分配能力)。

 

ACE HILIC-B相

ACE HILIC-B相具有合理的陰離子交換能力,從而可保留酸性分析物,同時堿性分析物將被排斥。

與ACE HILIC-A相似,pH值可影響固定相的電荷,因此可減弱或增強該相的正特性(該相的正電荷特性)。

發布者:廣州菲羅門科學儀器有限公司
聯系電話:020-22826668
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標簽: ACE HILIC色譜柱
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