九叔归来3魁蛊婴在线观看_男人躁女人到高潮AV_香港成人论坛_亚洲精品久久久久久偷窥_夜来香成人网_亚洲制服 视频在线观看_无毒黄站_国产传媒18精品A片一区_麻花豆传媒剧国产MV在线观看_东北60岁熟女露脸在线_国产高清视频在线观看97_一道本视频一二三区_yellow免费播放在线观看_浪漫樱花动漫在线观看官网_高清AV熟女一区_天堂在线www_亚洲第一成年人网站_黄色在线免费观看_av女优快播_久久精品99国产精品日本

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法

胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法

瀏覽次數:5537 發布日期:2019-3-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
      胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzyme disperse)。下面一起來看下這兩種方法。

1、貼塊法

方法:動物經頸動脈放血后,在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段,置于含Hank's液的平皿中漂洗3次,將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層,然后縱行切開血管,刮除內膜即內皮細胞迅速撕下中膜內、中層,切成約1mm寬的小條,浸泡在含血清的Hank's液中,并將撕下小組織塊種植于培養瓶壁。置于37℃恒溫箱,2h左右,取出培養瓶加入20% HyClone胎牛血清的培養液,再放回培養箱內靜止培養4天。4天后可見細胞從組織中遷移游出。

不同動物血管結構有差異,豬和猴較易操作,但小動物如兔、鼠因其血管小,血管壁薄等特點,使之難以分離。另外組織塊太薄,不易粘附培養基,也使細胞較難生長。為了保證培養的成功,應注意:

①種植組織塊的數目,如75cm2的長頸瓶組織塊不得少于30;

②根據培養細胞的種屬加入適量的不同血清,一般可加入牛血清,若小牛血清增殖效果差,應加胎牛血清(FBS),通常濃度為10%~20%;

③培養基的選擇:常用的有DMEM(Dulbecco's modified Eagles'medium),M199培養基。培養兔的平滑肌細胞用DMEM效果較好。

2、酶解離法

沿動脈縱軸切開后,刮除內皮細胞撕下中膜的內2/3,注意不要混入內皮細胞,將組織塊切成1-2mm2,放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養基中,37℃,0.5~1.5h。離心去上清,重復上述消化步驟,然后再離心(9000r,4min),收集細胞,在5%~10%同種血清或HyClone胎牛血清的M199培養基中調整細胞數,然后轉入30~90mm培養皿中培養,對于兔子應加入高濃度的谷氨酰胺(0.2g/L)較佳。不同研究者在培養基、酶濃度以及消化時間等的選擇都有很大的差異。

        綜上所述,貼塊法具有獲得平滑肌細胞純度高,量多,操作簡便的優點。但用貼塊法易使平滑肌細胞胞質內肌絲喪失,亞細胞器增加。相反,酶解離法,由于酶的作用使細胞間失去連接,細胞內肌絲含量豐富,保持收縮型狀態。培養平滑肌細胞常取材于兔、豬、鼠、猴的胸腹主動脈段。由于貼塊法和解離法處理方式不同,在細胞培養的zui初階段細胞形態和性質存在差異。隨著培養時間的延長,培養環境趨于一致,細胞特性上也趨于近似。
發布者:上海一研生物科技有限公司
聯系電話:021-69985186
E-mail:3004979817@qq.com

標簽: 血清培養
用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 桂林市| 拉萨市| 五常市| 东安县| 安阳县| 平阳县| 涿州市| 台东县| 水富县| 洛阳市| 灵石县| 开远市| 贵溪市| 新绛县| 嘉峪关市| 南丹县| 泰兴市| 桓仁| 平果县| 霍山县| 乌鲁木齐市| 望谟县| 长丰县| 兰州市| 江都市| 蓬安县| 原平市| 吴川市| 岳普湖县| 衡阳县| 曲麻莱县| 南安市| 阳东县| 天祝| 连江县| 大姚县| 鹿泉市| 蚌埠市| 惠来县| 永德县| 通州区|