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單細胞懸液制備全流程介紹及相關注意事項

瀏覽次數:430 發布日期:2025-5-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

流式細胞術做為一種快速的細胞定量分析技術,能夠同時對單個細胞進行多種特征參數的檢測,如細胞大小、DNA含量、蛋白質表達等,現已成為科研領域中不可或缺的重要工具。

流式檢測能順利進行的硬要求之一是,樣本必須能在鞘液中流動,因此,無論是培養的細胞,還是從各種組織中提取出來的細胞,都需要把待測樣本制備成單細胞懸液!制備欠妥的樣本,不僅會直接影響實驗的準確性和結果的可靠性,一些大的細胞團塊甚至會堵塞液流系統而影響儀器的正常運行。


實驗過程

1、取脾臟
頸椎脫臼法處死小鼠;在解剖臺上固定小鼠,從底端小心剪開小鼠整個腹部皮膚,暴露出小鼠腹膜;剪開小鼠腹膜,暴露出脾臟,摘取,并充分去除上面的脂肪組織;將取下的脾臟剪碎,置于預冷的PBS中浸泡待用

2、制備單細胞
使用凈信單細胞懸液制備儀,設置參數,點擊啟動,程序結束后加入終止液

3、裂解紅細胞
在離心后的細胞懸液中加入ACK紅細胞裂解液,重懸細胞,在室溫裂解5min

4、過濾洗滌
通過過濾網過濾,將過濾后的細胞懸液收集至離心管中,離心5min,去除上清液

5、單細胞計數
顯微鏡觀察細胞,使用染色緩沖液重懸細胞調整細胞濃度,吸取細胞懸液至流式管中,準備染色

結果分析:
 

小鼠脾臟活率99%,方便后續進行流式分析。

注意事項:

1.組織盡量剪碎,消化效果更好
2.摘取脾臟后,盡可能移除黏連的脂肪組織,提高脾臟細胞的占比
3.建議使用新鮮配制的紅細胞裂解液
4.消化后的細胞應洗滌干凈,否則影響流式效果

單細胞懸液制備儀不僅效率高、溫和,保護細胞活性,還精準可控,適應不同組織類型。高通量設計,提升實驗效率,對于需要處理多個樣本的研究項目,單細胞懸液制備儀的高通量設計可以同時處理多個樣本,大幅縮短實驗時間。選擇合適的儀器,可批量制備單細胞懸液,節約了實驗時間,根據需求選擇儀器中人體、小鼠各個組織、器官對應程序,提高了單細胞懸液制備的活率和得率,使后續實驗進行更加順利。

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